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一、范围
本标准适用于饲料中延胡索酸和泰妙菌素的含量测定。

二、引用标准
GB/T 6682 分析化学实验室用水规格
GB/T 20394 饲料中药物残留量的测定 高效液相色谱法
GB/T 21904 饲料中药物残留量的测定 液相色谱-串联质谱法
GB/T 21905 饲料中药物残留量的测定 气相色谱-质谱法
GB/T 21906 饲料中药物残留量的测定 气相色谱法

三、原理
样品经提取后，经过净化处理后，采用高效液相色谱法进行分析测定。

四、仪器和设备
1. 高效液相色谱仪
2. 恒温振荡器
3. 离心机
4. 超声波清洗器
5. 电子天平
6. 称量瓶
7. 注射器
8. 过滤器

五、试剂和材料
1. 甲醇
2. 乙腈
3. 硝酸钠
4. 氯化钠
5. 磷酸二氢钾
6. 磷酸氢二钠
7. 水
8. 饲料样品

六、操作步骤
1. 样品制备
取适量饲料样品，粉碎并混匀，称取0.5g样品，加入50mL甲醇，超声提取30min，离心10min，取上清液过滤，取10mL上清液加入10mL乙腈，超声混合10min，离心10min，取上清液过滤，即为待测样品溶液。
2. 标准曲线制备
取延胡索酸和泰妙菌素的标准品，分别称取适量，加入50mL甲醇，超声提取30min，离心10min，取上清液过滤，取10mL上清液加入10mL乙腈，超声混合10min，离心10min，取上清液过滤，即为标准品溶液。取不同浓度的标准品溶液，分别进行测定，绘制标准曲线。
3. 样品测定
取待测样品溶液，进行高效液相色谱测定，根据标准曲线计算样品中延胡索酸和泰妙菌素的含量。

七、结果计算
样品中延胡索酸和泰妙菌素的含量，按下式计算：
C=（A×V×D）/（m×k）
式中：
C——样品中延胡索酸和泰妙菌素的含量，mg/kg；
A——样品中延胡索酸和泰妙菌素的峰面积；
V——样品溶液的体积，mL；
D——标准品的稀释倍数；
m——样品的质量，g；
k——标准曲线的斜率。

八、质量控制
1. 标准品的制备和保存应符合相关标准的要求。
2. 样品的提取、净化和测定应在同一实验室内进行。
3. 每个样品应进行两次测定，结果的相对标准偏差不得大于10%。
4. 每个批次样品应加入空白样品和质控样品，进行质量控制。

相关标准：
GB/T 6682 分析化学实验室用水规格
GB/T 20394 饲料中药物残留量的测定 高效液相色谱法
GB/T 21904 饲料中药物残留量的测定 液相色谱-串联质谱法
GB/T 21905 饲料中药物残留量的测定 气相色谱-质谱法
GB/T 21906 饲料中药物残留量的测定 气相色谱法