绿原酸是一种常见的饲料添加剂，广泛应用于畜禽饲料中。绿原酸的含量对于饲料的质量和安全具有重要的意义。本标准采用高效液相色谱法测定饲料中绿原酸的含量，具有准确、快速、简便等优点。

1.范围
本标准适用于饲料中绿原酸的测定。

2.仪器和设备
2.1 高效液相色谱仪
2.2 色谱柱：C18色谱柱
2.3 称量仪
2.4 超声波清洗仪
2.5 离心机

3.试剂和材料
3.1 绿原酸标准品
3.2 甲醇
3.3 磷酸二氢钾
3.4 乙腈
3.5 纯水

4.样品的制备
4.1 取样
从饲料中取样，样品应当充分混合，取样量应当符合实际需要。
4.2 样品的制备
将样品粉碎并过筛，取适量样品称量，加入甲醇中超声波清洗，离心后取上清液，过滤后即可进行测定。

5.操作步骤
5.1 色谱条件
色谱柱：C18色谱柱
流动相：甲醇-磷酸二氢钾溶液（pH=2.5）（70:30）
流速：1.0 mL/min
检测波长：280 nm
柱温：25℃
5.2 样品的制备
将样品粉碎并过筛，取适量样品称量，加入甲醇中超声波清洗，离心后取上清液，过滤后即可进行测定。
5.3 标准曲线的绘制
取绿原酸标准品，分别加入甲醇中制成不同浓度的标准溶液，用高效液相色谱法测定其峰面积，绘制标准曲线。
5.4 样品的测定
将样品溶液注入高效液相色谱仪中，测定其峰面积，根据标准曲线计算出绿原酸的含量。

6.结果的计算
绿原酸的含量计算公式为：
绿原酸含量（mg/kg）=（样品峰面积/标准曲线斜率）×标准品浓度×稀释倍数

7.质量控制
7.1 标准品的制备
取绿原酸标准品，分别加入甲醇中制成不同浓度的标准溶液，用高效液相色谱法测定其峰面积，绘制标准曲线。
7.2 精密度
在同一天内，重复测定6次，计算相对标准偏差（RSD），RSD不得大于2%。
7.3 准确度
将已知浓度的标准品加入样品中，测定其峰面积，计算回收率，回收率应当在95%~105%之间。

相关标准
GB/T 6433-2017 饲料中绿原酸的测定
GB/T 6434-2017 饲料中黄酸钠的测定
GB/T 6435-2017 饲料中黄酸钙的测定
GB/T 6436-2017 饲料中黄酸铜的测定
GB/T 6437-2017 饲料中黄酸锌的测定