小麦全蚀病是由小麦全蚀病菌引起的一种重要的小麦病害,其危害严重,易于在小麦生产中造成经济损失。为了及时发现和控制小麦全蚀病,保障小麦生产的安全和稳定,制定本标准。
1.范围
本标准适用于小麦全蚀病的病原检测与病害诊断。
2.术语和定义
2.1 小麦全蚀病:由小麦全蚀病菌引起的小麦病害。
2.2 病原检测:对植物病害的病原体进行检测和鉴定。
2.3 病害诊断:通过对植物病害的症状、病原体等进行分析和判断,确定病害种类和病害程度。
3.检测方法
3.1 样品采集
3.1.1 样品采集时间:在小麦生长期间,发现小麦叶片出现黄色或白色斑点时,应及时采集样品进行检测。
3.1.2 样品采集方法:采用无菌铁针或无菌剪刀,将叶片、茎秆等部位的病斑切下,放入无菌离心管中,密封保存。
3.2 样品处理
3.2.1 样品处理前,应先进行外部消毒,避免外源性污染。
3.2.2 样品处理方法:将样品取出,用无菌水或无菌生理盐水洗涤,去除表面的杂质和细菌,然后用无菌纸巾吸干水分,备用。
3.3 DNA提取
3.3.1 DNA提取方法:采用商用DNA提取试剂盒进行提取,按照说明书操作。
3.3.2 DNA提取后,应进行质量检测,确保DNA质量符合要求。
3.4 PCR扩增
3.4.1 PCR扩增方法:采用特异性引物进行PCR扩增,扩增条件如下:95℃预变性5min,95℃变性30s,58℃退火30s,72℃延伸1min,共35个循环,最后72℃延伸10min。
3.4.2 PCR扩增后,应进行电泳检测,确定扩增产物大小和纯度。
3.5 结果判定和报告
3.5.1 结果判定:根据PCR扩增产物的大小和电泳图谱,判断样品是否为小麦全蚀病菌。
3.5.2 报告内容:报告应包括样品信息、检测方法、结果判定和结论等内容。
4.质量控制
4.1 仪器设备:PCR扩增仪、电泳仪等设备应符合国家标准。
4.2 试剂和材料:试剂和材料应符合国家标准。
4.3 操作人员:操作人员应具有相关专业知识和技能,严格按照操作规程进行操作。
相关标准
GB/T 23538-2009 小麦全蚀病菌检疫鉴定方法
GB/T 23539-2009 小麦全蚀病菌检疫鉴定规程
GB/T 23540-2009 小麦全蚀病菌检疫鉴定技术要求
GB/T 23541-2009 小麦全蚀病菌检疫鉴定结果判定和报告
GB/T 23542-2009 小麦全蚀病菌检疫鉴定质量控制