DB34/T 4198-2022
梨黑斑病菌的LAMP检测方法
发布时间:2022-06-29 实施时间:2022-07-29
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梨黑斑病是一种常见的梨树病害,由梨黑斑病菌引起。传统的检测方法主要依靠病斑的外观和病原菌的分离培养,这种方法存在着操作繁琐、耗时长、检测灵敏度低等问题。随着分子生物学技术的发展,LAMP(Loop-mediated isothermal amplification)技术逐渐成为一种快速、灵敏、特异的检测方法,被广泛应用于植物病原菌的检测。
本标准规定了梨黑斑病菌的LAMP检测方法,具体步骤如下:
1. 样品处理:将待检样品(如梨树叶片、果实、根部等)取适量,用无菌水或PBS缓冲液洗涤去除表面污染物,然后用无菌刀片切碎,取适量样品加入离心管中备用。
2. 试剂配制:按照试剂盒说明书中的配制方法,将LAMP反应体系所需的试剂配制好,包括LAMP酶混合液、LAMP引物混合液、LAMP增殖缓冲液等。
3. 反应体系:将样品加入LAMP反应管中,加入适量的LAMP反应体系试剂,混匀后密封。
4. 反应条件:将反应管放入恒温水浴中,温度设定为65℃,反应时间为60分钟。
5. 结果判定:反应结束后,观察反应管中是否有白色沉淀物生成,若有则说明样品中存在梨黑斑病菌。
本标准要求在实验室条件下进行,操作人员应具备分子生物学实验基础知识和技能,严格按照试剂盒说明书和本标准操作,确保检测结果的准确性和可靠性。
相关标准:
1. GB/T 28001-2011 质量管理体系要求
2. GB/T 19001-2016 质量管理体系要求
3. GB/T 24001-2016 环境管理体系要求
4. GB/T 28000-2011 安全管理体系要求
5. GB/T 19011-2016 管理体系审核指南