一、范围
本标准适用于饲料中卡巴氧的测定。

二、仪器和设备
1. 高效液相色谱仪
2. 色谱柱：C18色谱柱，5μm，4.6mm×250mm
3. 称量仪
4. 超声波清洗仪
5. 滤膜：0.45μm

三、试剂和材料
1. 甲醇：色谱纯
2. 乙腈：色谱纯
3. 磷酸二氢钾：分析纯
4. 磷酸氢二钠：分析纯
5. 水：离子交换纯
6. 卡巴氧标准品：纯度≥98%

四、操作步骤
1. 样品制备
取样品1g，加入50mL甲醇中，超声波清洗10min，离心10min，取上清液过滤，取10mL上清液加入50mL甲醇中，超声波清洗10min，离心10min，取上清液过滤，取5mL上清液加入10mL水中，超声波清洗10min，离心10min，取上清液过滤，取2mL上清液加入2mL乙腈中，超声波清洗10min，离心10min，取上清液过滤，即为样品溶液。
2. 标准曲线制备
取卡巴氧标准品0.1mg/mL，加入甲醇中制备1μg/mL、2μg/mL、5μg/mL、10μg/mL、20μg/mL的标准溶液。
3. 色谱条件
流动相：甲醇-水（70:30）
流速：1.0mL/min
柱温：30℃
检测波长：254nm
进样量：20μL
4. 操作步骤
（1）将样品溶液和标准溶液分别进样，进行色谱分离。
（2）根据标准曲线计算样品中卡巴氧的含量。

五、结果计算
样品中卡巴氧的含量（mg/kg）=（样品峰面积/标准品峰面积）×标准品浓度×稀释倍数×1000

六、质量控制
1. 标准曲线的线性范围为1μg/mL~20μg/mL，相关系数r≥0.999。
2. 样品的加标回收率为80%~120%。
3. 重复性：相对标准偏差（RSD）不大于5%。

相关标准
GB/T 6682-2008 分析化学实验室水质规范
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