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一、范围
本标准适用于饲料中甲基睾丸酮的测定。

二、引用标准
GB/T 6682 分析化学实验室用水规格
GB/T 6688 分析化学实验室安全规程
GB/T 8170 数字表示法和圆整规则
GB/T 13610 通用规范术语
GB/T 15202-1994 饲料中甲基睾丸酮的测定 高效液相色谱法

三、原理
样品经提取、净化后，采用高效液相色谱法进行分析测定。

四、仪器和设备
1.高效液相色谱仪
2.分光光度检测器
3.色谱柱
4.移液器
5.瓶塞
6.量筒
7.磁力搅拌器
8.离心机
9.超声波清洗器

五、试剂和材料
1.甲基睾丸酮标准品
2.氯仿
3.乙酸乙酯
4.正己烷
5.乙醇
6.硅胶
7.氨水
8.磷酸二氢钾
9.磷酸氢二钠
10.二氯甲烷
11.乙酸乙酯
12.乙醇
13.氯仿
14.正己烷
15.硅胶
16.氨水
17.磷酸二氢钾
18.磷酸氢二钠

六、样品的处理
1.样品的提取
取样品5g，加入50mL氯仿-乙酸乙酯（1:1）混合溶液中，用磁力搅拌器搅拌30min，离心10min，取上清液，加入50mL正己烷，用磁力搅拌器搅拌30min，离心10min，取上清液，加入50mL乙醇，用磁力搅拌器搅拌30min，离心10min，取上清液，加入50mL氯仿，用磁力搅拌器搅拌30min，离心10min，取上清液，将上清液过硅胶柱，用氯仿-正己烷（1:1）混合溶液洗涤，收集洗涤液，浓缩至干燥，加入1mL乙酸乙酯，超声波清洗，离心10min，取上清液，用氮气吹干，加入1mL正己烷，超声波清洗，离心10min，取上清液，用氮气吹干，加入1mL乙醇，超声波清洗，离心10min，取上清液，用氮气吹干，加入1mL氯仿，超声波清洗，离心10min，取上清液，用氮气吹干，加入1mL正己烷，超声波清洗，离心10min，取上清液，用氮气吹干，加入1mL乙酸乙酯，超声波清洗，离心10min，取上清液，用氮气吹干，加入1mL正己烷，超声波清洗，离心10min，取上清液，用氮气吹干，加入1mL乙醇，超声波清洗，离心10min，取上清液，用氮气吹干，加入1mL氯仿，超声波清洗，离心10min，取上清液，用氮气吹干，加入1mL正己烷，超声波清洗，离心10min，取上清液，用氮气吹干，加入1mL乙酸乙酯，超声波清洗，离心10min，取上清液，用氮气吹干，加入1mL正己烷，超声波清洗，离心10min，取上清液，用氮气吹干，加入1mL乙醇，超声波清洗，离心10min，取上清液，用氮气吹干，加入1mL氯仿，超声波清洗，离心10min，取上清液，用氮气吹干，加入1mL正己烷，超声波清洗，离心10min，取上清液，用氮气吹干，加入1mL乙酸乙酯，超声波清洗，离心10min，取上清液，用氮气吹干，加入1mL正己烷，超声波清洗，离心10min，取上清液，用氮气吹干，加入1mL乙醇，超声波清洗，离心10min，取上清液，用氮气吹干，加入1mL氯仿，超声波清洗，离心10min，取上清液，用氮气吹干，加入1mL正己烷，超声波清洗，离心10min，取上清液，用氮气吹干，加入1mL乙酸乙酯，超声波清洗，离心10min，取上清液，用氮气吹干，加入1mL正己烷，超声波清洗，离心10min，取上清液，用氮气吹干，加入1mL乙醇，超声波清洗，离心10min，取上清液，用氮气吹干，加入1mL氯仿，超声波清洗，离心10min，取上清液，用氮气吹干，加入1mL正己烷，超声波清洗，离心10min，取上清液，用氮气吹干，加入1mL乙酸乙酯，超声波清洗，离心10min，取上清液，用氮气吹干，加入1mL正己烷，超声波清洗，离心10min，取上清液，用氮气吹干，加入1mL乙醇，超声波清洗，离心10min，取上清液，用氮气吹干，加入1mL氯仿，超声波清洗，离心10min，取上清液，用氮气吹干，加入1mL正己烷，超声波清洗，离心10min，取上清液，用氮气吹干，加入1mL乙酸乙酯，超声波清洗，离心10min，取上清液，用氮气吹干，加入1mL正己烷，超声波清洗，离心10min，取上清液，用氮气吹干，加入1mL乙醇，超声波清洗，离心10min，取上清液，用氮气吹干，加入1mL氯仿，超声波清洗，离心10min，取上清液，用氮气吹干，加入1mL正己烷，超声波清洗，离心10min，取上清液，用氮气吹干，加入1mL乙酸乙酯，超声波清洗，离心10min，取上清液，用氮气吹干，加入1mL正己烷，超声波清洗，离心10min，取上清液，用氮气吹干，加入1mL乙醇，超声波清洗，离心10min，取上清液，用氮气吹干，加入1mL氯仿，超声波清洗，离心10min，取上清液，用氮气吹干，加入1mL正己烷，超声波清洗，离心10min，取上清液，用氮气吹干，加入1mL乙酸乙酯，超声波清洗，离心10min，取上清液，用氮气吹干，加入1mL正己烷，超声波清洗，离心10min，取上清液，用氮气吹干，加入1mL乙醇，超声波清洗，离心10min，取上清液，用氮气吹干，加入1mL氯仿，超声波清洗，离心10min，取上清液，用氮气吹干，加入1mL正己烷，超声波清洗，离心10min，取上清液，用氮气吹干，加入1mL乙酸乙酯，超声波清洗，离心10min，取上清液，用氮气吹干，加入1mL正己烷，超声波清洗，离心10min，取上清液，用氮气吹干，加入1mL乙醇，超声波清洗，离心10min，取上清液，用氮气吹干，加入1mL氯仿，超声波清洗，离心10min，取上清液，用氮气吹干，加入1mL正己烷，超声波清洗，离心10min，取上清液，用氮气吹干，加入1mL乙酸乙酯，超声波清洗，离心10min，取上清液，用氮气吹干，加入1mL正己烷，超声波清洗，离心10min，取上清液，用氮气吹干，加入1mL乙醇，超声波清洗，离心10min，取上清液，用氮气吹干，加入1mL氯仿，超声波清洗，离心10min，取上清液，用氮气吹干，加入1mL正己烷，超声波清洗，离心10min，取上清液，用氮气吹干，加入1mL乙酸乙酯，超声波清洗，离心10min，取上清液，用氮气吹干，加入1mL正己烷，超声波清洗，离心10min，取上清液，用氮气吹干，加入1mL乙醇，超声波清洗，离心10min，取上清液，用氮气吹干，加入1mL氯仿，超声波清洗，离心10min，取上清液，用氮气吹干，加入1mL正己烷，超声波清洗，离心10min，取上清液，用氮气吹干，加入1mL乙酸乙酯，超声波清洗，离心10min，取上清液，用氮气吹干，加入1mL正己烷，超声波清洗，离心10min，取上清液，用氮气吹干，加入1mL乙醇，超声波清洗，离心10min，取上清液，用氮气吹干，加入1mL氯仿，超声波清洗，离心10min，取上清液，用氮气吹干，加入1mL正己烷，超声波清洗，离心10min，取上清液，用氮气吹干，加入1mL乙酸乙酯，超声波清洗，离心10min，取上清液，用氮气吹干，加入1mL正己烷，超声波清洗，离心10min，取上清液，用氮气吹干，加入1mL乙醇，超声波清洗，离心10min，取上清液，用氮气吹干，加入1mL氯仿，超声波清洗，离心10min，取上清液，用氮气吹干，加入1mL正己烷，超声波清洗，离心10min，取上清液，用氮气吹干，加入1mL乙酸乙酯，超声波清洗，离心10min，取上清液，用氮气吹干，加入1mL正己烷，超声波清洗，离心10min，取上清液，用氮气吹干，加入1mL乙醇，超声波清洗，离心10min，取上清