一、范围
本标准适用于兽药粉剂/预混剂中甲氧苄啶的测定。

二、仪器设备
1. 高效液相色谱仪
2. 色谱柱：C18色谱柱（4.6mm×250mm，5μm）
3. 称量仪
4. 超声波清洗仪
5. 紫外可见分光光度计

三、试剂和材料
1. 甲氧苄啶参考物质
2. 甲氧苄啶样品
3. 乙腈
4. 磷酸二氢钾
5. 磷酸氢二钠
6. 甲醇
7. 纯水

四、操作步骤
1. 准备样品：将样品粉末称取0.5g，加入50ml乙腈中，超声波清洗10分钟，离心10分钟，取上清液过滤，取1ml过滤液加入10ml磷酸二氢钾-磷酸氢二钠缓冲液中，振荡均匀，离心5分钟，取上清液过滤，即为待测样品。
2. 准备标准曲线：取甲氧苄啶参考物质，加入甲醇中制成1mg/ml的标准溶液，再取不同浓度的标准溶液，分别加入磷酸二氢钾-磷酸氢二钠缓冲液中，制成不同浓度的标准曲线。
3. 进行测定：将待测样品和标准溶液分别注入高效液相色谱仪中，采用C18色谱柱进行分离，流动相为甲醇-磷酸二氢钾-磷酸氢二钠缓冲液（30:70），检测波长为254nm，流速为1.0ml/min，记录峰面积，计算甲氧苄啶的含量。

五、结果计算
甲氧苄啶的含量（%）=（样品峰面积/标准曲线斜率）×标准曲线中甲氧苄啶的浓度×100%。

六、质量控制
1. 甲氧苄啶参考物质的纯度应在98%以上。
2. 标准曲线的相关系数应大于0.999。
3. 样品的回收率应在95%~105%之间。

七、注意事项
1. 操作过程中应注意安全，避免接触甲氧苄啶。
2. 仪器设备应定期维护，保证准确性和稳定性。
3. 样品的制备和测定应按照标准要求进行，避免误差。

相关标准
GB/T 5009.199-2017 食品中甲氧苄啶的测定 气相色谱法
GB/T 31648-2015 兽药中甲氧苄啶的测定 高效液相色谱法
GB/T 31649-2015 兽药中甲氧苄啶的测定 液相色谱-串联质谱法
GB/T 31650-2015 兽药中甲氧苄啶的测定 液相色谱-紫外检测法
GB/T 31651-2015 兽药中甲氧苄啶的测定 液相色谱-荧光检测法