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一、范围
本标准适用于测定兽药散剂中氯霉素的含量。

二、仪器设备
1. 高效液相色谱仪
2. 色谱柱：C18色谱柱（4.6mm×250mm，5μm）
3. 紫外检测器：波长280nm
4. 称量器：精度为0.1mg的电子天平
5. 超声波清洗器

三、试剂和材料
1. 氯霉素标准品
2. 甲醇：色谱纯
3. 磷酸二氢钾：分析纯
4. 磷酸氢二钠：分析纯
5. 离子交换树脂：D201
6. 水：离子交换后的去离子水

四、操作步骤
1. 样品制备
取兽药散剂1g，加入50ml甲醇中，超声波清洗10分钟，离心10分钟，取上清液过滤，取1ml过滤液加入10ml甲醇中，超声波清洗10分钟，离心10分钟，取上清液过滤，即为样品溶液。
2. 氯霉素标准曲线的制备
取氯霉素标准品0.1g，加入50ml甲醇中，超声波清洗10分钟，离心10分钟，取上清液过滤，取1ml过滤液加入10ml甲醇中，超声波清洗10分钟，离心10分钟，取上清液过滤，即为氯霉素标准品溶液。取不同浓度的氯霉素标准品溶液，分别加入甲醇中，制备氯霉素标准曲线。
3. 色谱条件
流动相：甲醇-0.05mol/L磷酸二氢钾缓冲液（70:30）
流速：1.0ml/min
柱温：25℃
检测波长：280nm
进样量：20μl
4. 氯霉素含量的测定
取样品溶液20μl，注入色谱仪中，根据氯霉素标准曲线计算样品中氯霉素的含量。

五、结果计算
样品中氯霉素的含量（mg/g）=（样品峰面积/标准品峰面积）×标准品浓度×稀释倍数/样品质量

六、质量控制
1. 标准品的制备应按照本标准的要求进行。
2. 每个样品应重复测定3次，计算平均值。
3. 每个批次样品应测定1个空白样品，作为背景校正。
4. 每个批次样品应测定1个加标回收样品，回收率应在80%~120%之间。

相关标准：
1. GB/T 5009.199-2017 食品中氯霉素的测定 高效液相色谱法
2. GB/T 31648-2018 兽药中氯霉素的测定 高效液相色谱法
3. GB/T 31649-2018 兽药中氯霉素的测定 液相色谱-串联质谱法
4. GB/T 31650-2018 兽药中氯霉素的测定 气相色谱法
5. GB/T 31651-2018 兽药中氯霉素的测定 毛细管电泳法