DB32/T 1460-2009
鹅细小病毒的检测 PCR方法
发布时间:2009-09-16 实施时间:2009-12-16
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鹅细小病毒是一种常见的鹅病毒,能引起鹅的呼吸道、消化道和神经系统疾病。为了及时发现和控制鹅细小病毒的传播,需要对鹅进行定期检测。本标准提供了一种PCR方法,可用于鹅细小病毒的检测。
1. 样品的采集和提取
样品可以采集鹅的咽喉拭子、粪便、血液等。采集后,需要进行样品的提取。提取方法可以采用商用的DNA提取试剂盒,也可以采用传统的酚/氯仿法。提取后的DNA需要进行质量检测,确保DNA的纯度和浓度符合要求。
2. PCR反应体系的组成
PCR反应体系包括PCR反应缓冲液、酶、引物、模板DNA和水。其中,PCR反应缓冲液、酶和引物需要选择适合的商用试剂盒。模板DNA的用量需要根据样品的来源和提取方法进行优化,一般为50-100 ng。水的用量需要根据反应体系的总体积进行计算,一般为20-50 μL。
3. PCR反应条件
PCR反应条件包括反应温度、反应时间和循环次数。本标准推荐的PCR反应条件如下:
预变性:95℃,5 min
变性:95℃,30 s
退火:55℃,30 s
延伸:72℃,30 s
循环次数:35
最终延伸:72℃,10 min
4. PCR产物的检测和结果判定
PCR产物可以通过琼脂糖凝胶电泳进行检测。结果判定需要根据PCR产物的大小和数量进行判断。如果PCR产物大小和数量符合预期,说明样品中存在鹅细小病毒。
相关标准:
GB/T 4789.30-2016 食品微生物学检验 检验和鉴定鹅细小病毒
GB/T 22470-2008 鹅细小病毒灭活疫苗
GB/T 22471-2008 鹅细小病毒活疫苗
GB/T 22472-2008 鹅细小病毒诊断试剂盒
GB/T 22473-2008 鹅细小病毒抗体检测试剂盒