串珠镰刀菌素是一种广泛存在于饲料中的真菌毒素,对动物健康和生产性能有很大影响。因此,对饲料中的串珠镰刀菌素进行检测具有重要意义。本标准采用高效液相色谱法进行检测,具有灵敏度高、准确性好、操作简便等优点。
1. 原理
本方法采用高效液相色谱法,利用C18反相色谱柱分离,紫外检测器检测,外标法定量。
2. 试剂和仪器
2.1 甲醇:色谱纯。
2.2 乙腈:色谱纯。
2.3 磷酸二氢钾:分析纯。
2.4 磷酸氢二钠:分析纯。
2.5 纯水:经反渗透处理或等效处理。
2.6 串珠镰刀菌素标准品:纯度不低于98%。
2.7 饲料样品。
2.8 超声波清洗仪。
2.9 高效液相色谱仪。
3. 操作步骤
3.1 样品制备
将饲料样品粉碎并筛选,取1g样品加入50ml甲醇中,超声波清洗10分钟,离心10分钟,取上清液过滤,取1ml过滤液加入10ml甲醇中,超声波清洗10分钟,离心10分钟,取上清液过滤,即为待测样品。
3.2 标准曲线制备
取串珠镰刀菌素标准品适量,加入甲醇中制成1mg/ml的标准溶液,再取适量标准溶液加入甲醇中制成不同浓度的串珠镰刀菌素标准溶液,分别注入高效液相色谱仪中进行检测,得到标准曲线。
3.3 样品检测
取待测样品适量,加入甲醇中制成1mg/ml的样品溶液,注入高效液相色谱仪中进行检测,根据标准曲线计算出样品中串珠镰刀菌素的含量。
4. 结果计算
样品中串珠镰刀菌素的含量,按下式计算:
C=Cs×Vs/Vm
其中,C为样品中串珠镰刀菌素的含量,μg/g;
Cs为标准曲线上对应峰面积的串珠镰刀菌素含量,μg/ml;
Vs为样品溶液的体积,ml;
Vm为样品的质量,g。
5. 精密度和准确度
5.1 精密度
在同一天内,重复检测6个样品,计算相对标准偏差(RSD),RSD不应大于10%。
5.2 准确度
将已知浓度的串珠镰刀菌素标准品加入饲料样品中,进行检测,计算加标回收率,加标回收率应在80%~120%之间。
相关标准
GB/T 23594-2009 饲料中真菌毒素的检测 高效液相色谱法
GB/T 23595-2009 饲料中真菌毒素的检测 液相色谱-串联质谱法
GB/T 23596-2009 饲料中真菌毒素的检测 液相色谱-荧光检测法
GB/T 23597-2009 饲料中真菌毒素的检测 酶联免疫吸附测定法
GB/T 23598-2009 饲料中真菌毒素的检测 气相色谱法