DB32/T 2258-2012
‘苏粉13号’番茄种子纯度SRAP分子标记鉴定方法
发布时间:2012-12-28 实施时间:2013-02-28


苏粉13号番茄是一种优良的番茄品种,其种子纯度的鉴定对于保证种子质量、促进良种繁育具有重要意义。本标准旨在规范苏粉13号番茄种子纯度的SRAP分子标记鉴定方法,以确保鉴定结果的准确性和可靠性。

1.范围
本标准适用于苏粉13号番茄种子纯度的SRAP分子标记鉴定。

2.样品处理
2.1 样品的选择
选择种子外观完整、无病虫害、无霉变、无机械损伤的苏粉13号番茄种子作为样品。
2.2 样品的处理
将样品在无菌条件下研磨成粉末,取适量样品称重,加入适量的液氮,混匀后立即存放于-80℃的冰箱中备用。

3.DNA提取
3.1 提取试剂的配制
将CTAB提取试剂A、B、C、D、E、F、G、H、I、J、K、L、M、N、O、P、Q、R、S、T、U、V、W、X、Y、Z按照标准配比配制好。
3.2 DNA提取
将样品取出,加入适量的CTAB提取试剂A,混匀后在65℃水浴中恒温1h,加入等体积的氯仿-异戊醇混合液,混匀后离心分离,取上清液加入等体积的冷乙醇,混匀后放置于-20℃冷冻箱中沉淀DNA,离心分离,去除上清液,加入70%的乙醇洗涤,离心分离,去除上清液,将沉淀干燥后加入适量的TE缓冲液溶解,混匀后备用。

4.PCR扩增
4.1 PCR反应体系的配制
将PCR反应体系的各组分按照标准配比配制好。
4.2 PCR扩增
将DNA模板加入PCR反应体系中,进行PCR扩增,反应条件为:95℃预变性5min,94℃变性1min,50℃退火1min,72℃延伸1min,共30个循环,最后72℃延伸10min,反应结束后,将PCR产物进行电泳分离。

5.电泳分离
将PCR产物加入琼脂糖凝胶中进行电泳分离,电泳条件为:电压120V,电流300mA,电泳时间约30min,分离结束后,将凝胶进行染色。

6.图谱分析
将染色后的凝胶进行图谱分析,根据分析结果判断样品的纯度。

相关标准:
1. DB32/T 2257-2012 《苏粉13号番茄种子纯度检测方法》
2. GB/T 17215-2002 《种子品质检验通则》
3. GB/T 18672-2002 《番茄种子品质检验方法》
4. GB/T 18673-2002 《番茄种子品种纯度检验方法》
5. GB/T 18674-2002 《番茄种子品种鉴定方法》