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水稻是我国的主要粮食作物之一,品种繁多,品种纯度的检测和鉴定对于保证种子质量和推广优良品种具有重要意义。常规水稻品种纯度检测的方法有很多,其中SSR方法是一种常用的分子生物学检测方法。本标准旨在规范常规水稻品种纯度检测的SSR方法,以提高检测的准确性和可靠性。
1. 适用范围
本标准适用于常规水稻品种纯度检测的SSR方法。
2. 仪器和试剂
2.1 DNA提取试剂盒
2.2 PCR扩增试剂盒
2.3 DNA电泳仪
2.4 DNA分子量标准品
3. 样品的提取
3.1 样品的准备
将水稻种子或幼苗样品取出,用无菌水洗净,晾干后磨成粉末备用。
3.2 DNA提取
按照DNA提取试剂盒说明书进行提取,得到DNA样品。
4. PCR扩增
4.1 PCR反应体系
PCR反应总体积为25μL,包括2.5μL 10×PCR缓冲液、2.0μL 2.5mM dNTPs、0.5μL 10μM引物、0.25μL Taq DNA聚合酶、1μL DNA模板和18.75μL ddH2O。
4.2 PCR反应条件
PCR反应条件为:94℃预变性5min,94℃变性30s,55℃退火30s,72℃延伸1min,共35个循环,最后72℃延伸10min。
4.3 PCR产物检测
将PCR产物进行电泳分离,用DNA分子量标准品进行比较,确定PCR产物的大小。
5. 数据分析
将PCR产物的大小数据输入到专业软件中进行分析,根据分析结果判断水稻品种的纯度。
相关标准:
GB/T 20481-2006 水稻种子品质检验方法
GB/T 20482-2006 水稻种子品种纯度检验方法
GB/T 20483-2006 水稻种子萌发力检验方法
GB/T 20484-2006 水稻种子杂质检验方法
GB/T 20485-2006 水稻种子水分检验方法