一、范围
本标准适用于保健食品中大豆异黄酮的测定。

二、仪器设备
1. 高效液相色谱仪
2. 恒温水浴器
3. 离心机
4. 超声波清洗器
5. 称量器
6. 精密滴定管
7. 滤膜

三、试剂和材料
1. 大豆异黄酮标准品
2. 甲醇
3. 乙腈
4. 磷酸二氢钾
5. 磷酸氢二钠
6. 硫酸铵
7. 纯水

四、操作步骤
1. 标准曲线的制备
（1）取大豆异黄酮标准品0.1mg/mL的甲醇溶液，分别取1mL、2mL、3mL、4mL、5mL，加入5mL的甲醇中，制成浓度分别为0.02mg/mL、0.04mg/mL、0.06mg/mL、0.08mg/mL、0.1mg/mL的标准溶液。
（2）将标准溶液过滤，取适量进样，进行高效液相色谱分析，得到峰面积与浓度的标准曲线。

2. 样品的制备
（1）取保健食品样品1g，加入10mL的甲醇，超声波清洗10min，离心10min，取上清液。
（2）将上清液过滤，取适量进样，进行高效液相色谱分析。

3. 分析条件
（1）色谱柱：C18色谱柱（4.6mm×250mm，5μm）
（2）流动相：甲醇-水（含0.1%磷酸二氢钾）（40:60）
（3）流速：1.0mL/min
（4）检测波长：254nm
（5）柱温：30℃
（6）进样量：20μL

4. 结果计算
（1）用标准曲线计算样品中大豆异黄酮的含量。
（2）样品中大豆异黄酮的含量计算公式：C=V×C1/V1，其中C为样品中大豆异黄酮的含量（mg/g），V为样品进样量（mL），C1为标准曲线上对应峰面积的浓度（mg/mL），V1为标准品溶液的体积（mL）。

五、质量控制
1. 标准品的制备应按照标准曲线制备方法制备。
2. 样品的制备应按照操作步骤制备。
3. 每个样品应进行3次测定，取平均值作为最终结果。

相关标准
1. GB/T 5009.5-2016 食品中脂肪酸甲酯的测定 气相色谱法
2. GB/T 5009.33-2016 食品中脂溶性维生素的测定 高效液相色谱法
3. GB/T 5009.28-2016 食品中铅的测定 石墨炉原子吸收光谱法
4. GB/T 5009.12-2017 食品中总磷的测定 高效液相色谱法
5. GB/T 5009.11-2017 食品中总氮的测定 半微量氮测定法