DB22/T 2049-2014
动物源性饲料中鸭源性成分测定 PCR方法
发布时间:2014-02-28 实施时间:2014-04-30


动物源性饲料是指以动物体或其副产品为原料制成的饲料,如鱼粉、肉骨粉、血粉等。其中,鸭源性成分是指以鸭肉、鸭肝、鸭血、鸭肠等为原料制成的饲料。为了保证动物源性饲料的质量和安全,需要对其中的鸭源性成分进行检测。本标准规定了一种PCR方法,用于检测动物源性饲料中的鸭源性成分。

1. 原理
本方法利用PCR技术,通过特异性引物扩增鸭源性成分的DNA序列,从而检测动物源性饲料中的鸭源性成分。

2. 试剂和仪器
2.1 试剂
(1)DNA提取试剂盒
(2)PCR试剂盒
(3)引物
(4)鸭源性成分DNA标准品
(5)蒸馏水

2.2 仪器
(1)PCR仪
(2)电泳仪

3. 样品处理
3.1 样品的制备
将动物源性饲料样品取1g,加入10mL的DNA提取试剂盒中,按照试剂盒说明书进行DNA提取。

3.2 DNA浓度的测定
将DNA提取液离心,取上清液,用分光光度计测定DNA浓度。

4. PCR扩增
4.1 PCR反应体系
PCR反应体系如下表所示:

试剂 | 体积(μL)
---|---
2×PCR Mix | 12.5
引物1 | 0.5
引物2 | 0.5
DNA模板 | 2
蒸馏水 | 9.5
总体积 | 25

4.2 PCR反应条件
PCR反应条件如下表所示:

步骤 | 温度(℃) | 时间(min)
---|---|---
预变性 | 95 | 5
变性 | 95 | 30
退火 | 55 | 30
延伸 | 72 | 30
最终延伸 | 72 | 10

4.3 PCR产物检测
将PCR产物进行电泳检测,检测结果如下图所示:

![PCR产物检测结果](https://img-blog.csdn.net/20180522163412909?watermark/2/text/aHR0cHM6Ly9ibG9nLmNzZG4ubmV0L3N0YXRpY19pbWFnZS9nYWl6aW5n/font/5a6L5L2T/fontsize/400/fill/I0JBQkFCMA==/dissolve/70/q/85)

5. 结果判定
样品中出现与鸭源性成分DNA标准品相同大小的PCR产物带,即可判定样品中含有鸭源性成分。

相关标准:
1. GB/T 6432-2018 动物饲料中粗蛋白质的测定
2. GB/T 6433-2018 动物饲料中粗脂肪的测定
3. GB/T 6434-2018 动物饲料中粗纤维的测定
4. GB/T 6435-2018 动物饲料中灰分的测定
5. GB/T 6436-2018 动物饲料中水分的测定