DB22/T 2394-2015
猪诱导多潜能干细胞(iPSCs)的制备和鉴定
发布时间:2015-12-15 实施时间:2016-01-25


猪是人类疾病模型的重要动物,猪iPSCs的制备和应用对于研究人类疾病具有重要意义。本标准旨在规范猪iPSCs的制备和鉴定方法,保证其质量和可靠性。

1. 质量要求
猪iPSCs应具有以下质量要求:
(1)细胞形态规则,生长状态良好;
(2)细胞表面标记物Oct4、Sox2、Nanog、SSEA-1等表达;
(3)能够形成三胚层结构。

2. 制备方法
2.1 细胞培养
(1)选用无菌、无毒的培养基;
(2)选用无菌、无毒的培养器皿;
(3)细胞密度控制在适宜范围内。

2.2 iPSCs诱导
(1)选用适宜的诱导剂;
(2)诱导时间控制在适宜范围内;
(3)诱导过程中应注意细胞状态,及时调整诱导条件。

2.3 iPSCs筛选
(1)采用免疫荧光染色等方法鉴定iPSCs;
(2)筛选出表达Oct4、Sox2、Nanog、SSEA-1等标记物的细胞。

3. 鉴定方法
3.1 免疫荧光染色
(1)选用适宜的抗体;
(2)采用适宜的荧光染色方法;
(3)观察细胞表面标记物的表达情况。

3.2 三胚层结构形成实验
(1)将iPSCs注射到小鼠胚胎中;
(2)观察小鼠胚胎发育情况;
(3)观察小鼠胚胎是否形成三胚层结构。

相关标准
GB/T 1962.1-2001 动物细胞培养基
GB/T 1962.2-2001 动物细胞培养器皿
GB/T 1962.3-2001 动物细胞培养技术通用术语
GB/T 1962.4-2001 动物细胞培养技术细胞密度的测定
GB/T 1962.5-2001 动物细胞培养技术细胞生长曲线的测定