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饲料是动物生产中不可或缺的重要组成部分,而其中可能存在的致病菌会对动物的健康产生不良影响,甚至会对人类的健康造成威胁。因此,对饲料中的致病菌进行检测是非常必要的。本标准旨在规定饲料中沙门氏菌的微滴数字PCR检测方法,以保障动物生产的安全和健康。
1.范围
本标准适用于饲料中沙门氏菌的微滴数字PCR检测。
2.引用文件
GB/T 6682-2008 分析化学实验室水质规范及评价标准
GB/T 191-2008 包装、装卸、贮存标志和表示方法
GB/T 6688-2008 分析化学实验室安全操作规程
GB/T 26979-2011 食品安全国家标准 食品中沙门氏菌检验方法 微生物学方法
3.术语和定义
3.1 微滴数字PCR法
微滴数字PCR法是一种基于微流控芯片技术的PCR检测方法,能够实现高通量、高灵敏度、高精度的检测。
3.2 沙门氏菌
沙门氏菌是一种革兰氏阴性菌,是一种常见的食源性病原菌,能够引起人和动物的肠道感染。
4.原理
本标准采用微滴数字PCR法对饲料中的沙门氏菌进行检测。具体原理如下:
将饲料样品中的沙门氏菌DNA提取出来,然后进行PCR扩增。在PCR扩增过程中,将扩增产物分装到微滴中,每个微滴中只有一个扩增产物。然后将微滴放到微流控芯片中,进行数字PCR检测。最后根据检测结果计算出样品中沙门氏菌的数量。
5.试验仪器和设备
5.1 微滴数字PCR仪
5.2 微流控芯片
5.3 PCR仪
5.4 离心机
5.5 超净工作台
5.6 电子天平
5.7 常温离心管
6.试验材料和试剂
6.1 饲料样品
6.2 沙门氏菌DNA提取试剂盒
6.3 PCR试剂盒
6.4 离心管
6.5 纯水
7.操作步骤
7.1 样品处理
取适量饲料样品,加入适量纯水,混合均匀后离心,取上清液进行下一步操作。
7.2 DNA提取
按照沙门氏菌DNA提取试剂盒说明书进行操作,提取样品中的沙门氏菌DNA。
7.3 PCR扩增
按照PCR试剂盒说明书进行操作,将提取的沙门氏菌DNA进行PCR扩增。
7.4 微滴数字PCR检测
将PCR扩增产物分装到微滴中,然后将微滴放到微流控芯片中进行数字PCR检测。
7.5 结果分析
根据检测结果计算出样品中沙门氏菌的数量。
8.结果表达
样品中沙门氏菌的数量应该以CFU/g为单位进行表示。
9.质量控制
9.1 试验前应进行质量控制,确保试验结果的准确性和可靠性。
9.2 试验过程中应严格按照操作规程进行操作,避免操作误差。
9.3 试验过程中应注意实验室安全,避免发生意外事故。
相关标准:
GB/T 6682-2008 分析化学实验室水质规范及评价标准
GB/T 191-2008 包装、装卸、贮存标志和表示方法
GB/T 6688-2008 分析化学实验室安全操作规程
GB/T 26979-2011 食品安全国家标准 食品中沙门氏菌检验方法 微生物学方法
GB/T 2688.2-2017 饲料中三种致病菌检测 微滴数字PCR法 第2部分:大肠杆菌