DB22/T 2629-2017
猪肠道微孢子虫检测 聚合酶链式反应(PCR)法
发布时间:2017-06-12 实施时间:2017-08-12
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猪肠道微孢子虫是一种寄生在猪肠道上皮细胞上的原生动物,能引起猪的肠道疾病,严重影响猪的生长发育和养殖效益。因此,对猪肠道微孢子虫的检测具有重要意义。目前,PCR技术已成为猪肠道微孢子虫检测的主要方法之一。
本标准规定了猪肠道微孢子虫检测的PCR方法,具体步骤如下:
1. 样品处理
将猪肠道组织样品或粪便样品收集并保存在离心管中,加入PBS缓冲液混匀,离心沉淀,去除上清液,重复以上步骤2-3次,最后加入PBS缓冲液使样品悬浮。
2. DNA提取
将样品加入离心管中,加入蛋白酶K和SDS混匀,加入异丙醇混匀,离心沉淀,去除上清液,加入70%乙醇洗涤,离心沉淀,去除上清液,干燥后加入TE缓冲液溶解。
3. PCR扩增
将DNA模板加入PCR反应管中,加入引物和PCR反应液混匀,进行PCR扩增。
4. PCR产物检测
将PCR产物加入琼脂糖凝胶中进行电泳,观察PCR产物条带。
本标准要求PCR反应体系中引物的设计和浓度、PCR反应条件、PCR产物检测等方面均需符合标准规定。同时,本标准还要求实验室应具备PCR技术操作能力和质量控制体系。
相关标准:
GB/T 4789.3-2016 食品安全国家标准 食品微生物学检验 通用检验方法
GB/T 4789.4-2016 食品安全国家标准 食品微生物学检验 革兰氏阳性菌检验
GB/T 4789.5-2016 食品安全国家标准 食品微生物学检验 革兰氏阴性菌检验
GB/T 4789.6-2016 食品安全国家标准 食品微生物学检验 酵母和霉菌检验
GB/T 4789.7-2016 食品安全国家标准 食品微生物学检验 肠道致病菌检验