DB22/T 2812-2017
番茄细菌性溃疡病病原检测 LAMP法
发布时间:2017-12-11 实施时间:2018-04-01


番茄细菌性溃疡病是由革兰氏阴性菌Pseudomonas syringae pv. tomato引起的一种重要的细菌性病害,其主要危害番茄作物,严重影响番茄的产量和品质。因此,对番茄细菌性溃疡病的快速、准确检测具有重要意义。

LAMP法(Loop-mediated isothermal amplification)是一种新型的核酸扩增技术,具有快速、高效、简便等优点。本标准规定了番茄细菌性溃疡病病原检测的LAMP法,具体内容如下:

1.样品处理
样品采集后,应立即送至实验室进行处理。样品处理前,应先将样品表面的杂质清除干净,然后将样品切碎,加入适量的PBS缓冲液,混合均匀后离心沉淀,取上清液作为检测样品。

2.试剂盒配置
试剂盒应包括LAMP反应体系所需的所有试剂,如LAMP酶混合物、引物、探针等。试剂盒应在4℃下保存,使用前应充分混匀。

3.反应体系
LAMP反应体系应包括LAMP酶混合物、引物、探针、样品DNA和反应缓冲液。反应体系的最终体积为25μL,其中LAMP酶混合物的浓度为8U/μL,引物和探针的浓度为0.2μM,样品DNA的浓度为10ng/μL。

4.PCR仪参数设置
PCR仪参数应设置为65℃,反应时间为60min。反应结束后,将PCR管取出,放置于室温下静置5min。

5.结果判定
反应结束后,观察PCR管内是否有白色沉淀物生成,若有,则说明样品中存在番茄细菌性溃疡病病原。同时,还可以通过电泳等方法对PCR产物进行检测,以进一步确认结果。

相关标准
GB/T 4789.30-2016 食品微生物学检验 植物源食品中细菌性病原微生物的检验
GB/T 28037-2011 植物病原菌检疫鉴定技术规范
GB/T 28038-2011 植物病原菌检疫鉴定技术规范 番茄细菌性溃疡病
GB/T 28039-2011 植物病原菌检疫鉴定技术规范 番茄斑点萎凋病
GB/T 28040-2011 植物病原菌检疫鉴定技术规范 番茄黄化曲叶病