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一、范围
本标准适用于长白山林蛙油中1-甲基海因的测定。

二、引用标准
GB/T 6682 分析化学实验室用水规格
GB/T 6688 分析化学实验室安全操作规程
GB/T 8170 数字表示法和圆整规则
GB/T 12528 化学试剂 通用技术要求
GB/T 13610 一般实验室用玻璃器皿

三、仪器设备
1. 高效液相色谱仪：采用二元高压梯度泵、自动进样器、紫外检测器等组成。
2. 色谱柱：C18色谱柱，5μm，4.6mm×250mm。
3. 称量仪：精度为0.1mg。
4. 超声波清洗仪：功率为100W。
5. 恒温水浴器：温度范围为20℃~100℃。

四、试剂和材料
1. 1-甲基海因标准品：纯度≥98%。
2. 甲醇：色谱纯。
3. 磷酸二氢钾：分析纯。
4. 磷酸：分析纯。
5. 水：色谱纯。
6. 长白山林蛙油样品：经过提取和净化处理。

五、操作步骤
1. 标准曲线的制备
(1) 取1-甲基海因标准品0.1mg，加入10ml甲醇中，摇匀，得到1mg/L的标准溶液。
(2) 取1mg/L的标准溶液，分别加入甲醇中，制备出不同浓度的标准溶液，浓度范围为0.01~1mg/L。
(3) 取不同浓度的标准溶液，分别注入高效液相色谱仪中，测定峰面积，绘制出标准曲线。

2. 样品的制备
(1) 取长白山林蛙油样品1g，加入10ml甲醇中，超声波清洗10min，离心沉淀，取上清液。
(2) 取上清液1ml，加入10ml甲醇中，摇匀，得到样品溶液。

3. 色谱条件
(1) 流动相：甲醇-水（70:30）。
(2) 流速：1.0ml/min。
(3) 柱温：30℃。
(4) 检测波长：254nm。
(5) 进样量：10μl。

4. 测定
(1) 取样品溶液10μl，注入高效液相色谱仪中，测定峰面积。
(2) 根据标准曲线计算出样品中1-甲基海因的含量。

六、结果计算
样品中1-甲基海因的含量（mg/kg）=样品中1-甲基海因峰面积/标准曲线斜率×样品溶液体积×样品质量

七、质量控制
1. 标准曲线的制备应符合GB/T 12528的要求。
2. 样品制备过程中，应注意避免污染。
3. 每个样品应进行两次测定，结果的相对标准偏差不得大于10%。
4. 每天开始测定前，应进行仪器的空白测定和系统适应性试验。

相关标准：
GB/T 6682 分析化学实验室用水规格
GB/T 6688 分析化学实验室安全操作规程
GB/T 8170 数字表示法和圆整规则
GB/T 12528 化学试剂 通用技术要求
GB/T 13610 一般实验室用玻璃器皿