长白山林蛙油是一种珍贵的中药材，具有很高的药用价值。为了保证长白山林蛙油的质量，需要对其进行测定。本标准采用高效液相色谱法进行测定，具有准确、快速、灵敏等优点。

1. 仪器和试剂
1.1 高效液相色谱仪
1.2 C18色谱柱
1.3 甲醇
1.4 乙腈
1.5 磷酸二氢钾
1.6 磷酸氢二钠
1.7 离心管
1.8 称量器

2. 样品的制备
2.1 取长白山林蛙油10g，加入50ml甲醇中，超声处理30min，离心10min，取上清液备用。
2.2 取上清液1ml，加入10ml乙腈中，超声处理5min，离心10min，取上清液备用。

3. 色谱条件
3.1 流动相：甲醇-0.05%磷酸二氢钾溶液（70:30）
3.2 流速：1.0ml/min
3.3 柱温：30℃
3.4 检测波长：254nm

4. 样品的测定
4.1 取上清液1μl注入色谱柱中，进行分离。
4.2 记录色谱图，测定峰面积。
4.3 用标准品制备不同浓度的标准曲线，计算样品中长白山林蛙油的含量。

5. 结果的计算
5.1 样品中长白山林蛙油的含量计算公式为：C=As/Ai×Cs，其中C为样品中长白山林蛙油的含量，As为样品峰面积，Ai为内标峰面积，Cs为内标的浓度。
5.2 结果应取三次测定的平均值。

相关标准
GB/T 5009.33-2017 食品中脂肪酸甲酯的测定 气相色谱法
GB/T 5009.37-2017 食品中脂肪酸甲酯的测定 液相色谱法
GB/T 5009.39-2017 食品中脂肪酸甲酯的测定 高效液相色谱法
GB/T 5009.40-2017 食品中脂肪酸甲酯的测定 离子色谱法
GB/T 5009.41-2017 食品中脂肪酸甲酯的测定 红外光谱法