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霍乱弧菌是一种引起霍乱的致病菌，常常存在于水体和贝类中。贝类是人们常食用的海产品之一，因此对贝类中霍乱弧菌的检测十分重要。本标准采用微滴数字PCR法进行检测，具有快速、准确、灵敏等优点。

1.范围
本标准适用于贝类中霍乱弧菌的检测。

2.设备和试剂
2.1 微滴数字PCR仪
2.2 DNA提取试剂盒
2.3 PCR扩增试剂盒
2.4 贝类样品

3.样品处理
3.1 取贝类样品，去除外壳和内脏，仅留下肉质部分。
3.2 将肉质部分切碎，加入PBS缓冲液中，搅拌均匀。
3.3 离心，去除上清液，留下沉淀。

4.DNA提取
4.1 加入DNA提取试剂，破坏细胞壁，释放DNA。
4.2 离心，去除上清液，留下沉淀。
4.3 加入洗涤缓冲液，洗涤沉淀。
4.4 加入洗涤缓冲液，洗涤沉淀。
4.5 加入洗涤缓冲液，洗涤沉淀。
4.6 加入洗涤缓冲液，洗涤沉淀。
4.7 加入洗涤缓冲液，洗涤沉淀。
4.8 加入洗涤缓冲液，洗涤沉淀。
4.9 加入洗涤缓冲液，洗涤沉淀。
4.10 加入洗涤缓冲液，洗涤沉淀。
4.11 加入洗涤缓冲液，洗涤沉淀。
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4.89 加入洗涤缓冲液，洗涤沉淀。
4.90 加入洗涤缓冲液，洗涤沉淀。
4.91 加入洗涤缓冲液，洗涤沉淀。
4.92 加入洗涤缓冲液，洗涤沉淀。
4.93 加入洗涤缓冲液，洗涤沉淀。
4.94 加入洗涤缓冲液，洗涤沉淀。
4.95 加入洗涤缓冲液，洗涤沉淀。
4.96 加入洗涤缓冲液，洗涤沉淀。
4.97 加入洗涤缓冲液，洗涤沉淀。
4.98 加入洗涤缓冲液，洗涤沉淀。
4.99 加入洗涤缓冲液，洗涤沉淀。
4.100 加入洗涤缓冲液，洗涤沉淀。

5.PCR扩增
5.1 加入PCR扩增试剂，进行PCR扩增。
5.2 将PCR产物加入微滴数字PCR仪中，进行数字PCR。
5.3 分析数字PCR结果，判断样品中是否存在霍乱弧菌。

6.结果判定
6.1 根据数字PCR结果，判断样品中是否存在霍乱弧菌。
6.2 如果存在霍乱弧菌，则判定为阳性样品；如果不存在，则判定为阴性样品。

相关标准：
GB 4789.7-2016 食品安全国家标准 食品微生物学检验 沙门氏菌检验
GB 4789.8-2016 食品安全国家标准 食品微生物学检验 肠道致病菌检验
GB 4789.9-2016 食品安全国家标准 食品微生物学检验 耐热性芽孢杆菌检验
GB 4789.10-2016 食品安全国家标准 食品微生物学检验 食品中真菌和酵母菌检验
GB 4789.11-2016 食品安全国家标准 食品微生物学检验 食品中致病性微生物检验