DB22/T 3087-2019
猪流行性腹泻病毒经典与变异毒株鉴别qPCR法
发布时间:2019-12-25 实施时间:2020-02-01
猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)是一种引起猪流行性腹泻的病原体,属于科学家们熟知的冠状病毒家族。PEDV的感染会导致猪的腹泻、呕吐、脱水等症状,严重时可导致猪只死亡。PEDV的流行给养猪业带来了巨大的经济损失,因此对PEDV的检测和鉴别显得尤为重要。
目前,PEDV已经出现了多种变异毒株,这些变异毒株与经典毒株在基因序列上存在差异,因此需要开发一种能够鉴别经典毒株和变异毒株的检测方法。本标准就是为了解决这个问题而制定的。
本标准采用qPCR技术进行检测,该技术具有灵敏度高、特异性强、快速、准确等优点。具体操作步骤如下:
1.提取病毒RNA:将样品(如猪粪便)加入病毒RNA提取试剂,经过离心、洗涤、溶解等步骤,提取出病毒RNA。
2.合成cDNA:将提取出的病毒RNA进行逆转录反应,合成cDNA。
3.qPCR检测:将合成的cDNA作为模板,进行qPCR检测。本标准采用SYBR Green I荧光染料进行检测,检测PEDV的S基因和N基因的特异性区域。
4.数据分析:根据qPCR仪器的软件分析检测结果,判断样品中是否存在PEDV,并鉴别其是否为经典毒株或变异毒株。
本标准的实施可以提高PEDV的检测准确性和鉴别能力,为疫情监测、疫苗研发等领域提供技术支持。
相关标准
GB/T 22470-2008 猪流行性腹泻病毒检测方法
GB/T 22471-2008 猪流行性腹泻病毒抗原检测方法
GB/T 22472-2008 猪流行性腹泻病毒抗体检测方法
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GB/T 22474-2008 猪流行性腹泻病毒疫苗检测方法