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流感病毒是一种常见的呼吸道病毒，可引起轻重不同的疾病，甚至危及生命。流感病毒的HA和NA基因是其表面抗原的主要组成部分，也是流感病毒分类的重要依据。因此，对流感病毒HA和NA基因的检测具有重要意义。

本标准是流感病毒HA和NA基因荧光RT-PCR检测的第3部分，适用于H3N8亚型马流感病毒的检测。本标准包括样品处理、核酸提取、RT-PCR扩增、结果判读等步骤。

样品处理：样品可以是马的鼻咽部分泌物、肺部组织、血液等。样品应在采集后尽快送至实验室进行处理。样品处理包括离心、去除红细胞、加入裂解液等步骤，旨在提取样品中的核酸。

核酸提取：核酸提取是本标准的关键步骤之一。核酸提取方法应选择适合样品类型和检测要求的方法，如磁珠法、硅胶膜法等。提取的核酸应具有高纯度、高质量和高浓度，以保证后续的RT-PCR扩增。

RT-PCR扩增：RT-PCR扩增是本标准的核心步骤之一。RT-PCR反应体系应包括反转录酶、PCR酶、引物、荧光探针等。扩增条件应根据实验室的具体情况进行优化，如反转录温度、PCR循环数、荧光信号阈值等。扩增结果应进行分析和判读，以确定样品中是否存在H3N8亚型马流感病毒。

结果判读：结果判读应根据荧光信号阈值和扩增曲线形状进行判断。荧光信号阈值应设定在合适的范围内，以保证结果的准确性和可靠性。扩增曲线形状应呈S型，且荧光信号阈值应在指定的范围内，才能判定为阳性结果。

本标准的实施可以提高流感病毒HA和NA基因荧光RT-PCR检测的准确性和可靠性，为流感病毒的检测提供技术支持。

相关标准：
GB/T 22470-2008 流感病毒HA基因荧光RT-PCR检测
GB/T 22471-2008 流感病毒NA基因荧光RT-PCR检测
DB22/T 3172.1-2020 流感病毒HA和NA基因荧光RT-PCR检测 第1部分：H1亚型人流感病毒
DB22/T 3172.2-2020 流感病毒HA和NA基因荧光RT-PCR检测 第2部分：H5亚型禽流感病毒
DB22/T 3172.4-2020 流感病毒HA和NA基因荧光RT-PCR检测 第4部分：H7亚型禽流感病毒