DB22/T 3366-2022
牛中华泰勒虫病检测 PCR法
发布时间:2022-05-18 实施时间:2022-06-08
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牛中华泰勒虫病是由中华泰勒虫引起的一种传染病,主要通过蜱虫传播。该病在牛群中的发病率较高,严重影响了养殖业的发展。因此,对牛中华泰勒虫病的检测显得尤为重要。
PCR法是一种高灵敏度、高特异性的检测方法,已被广泛应用于病原体的检测。本标准规定了牛中华泰勒虫病检测的PCR法,具体内容如下:
1.样品采集
样品采集应选择病情明显的牛,采集血液、淋巴结、脾脏等组织样品。采集后应立即送至实验室进行处理。
2.DNA提取
样品处理前应先进行消毒处理,避免污染。DNA提取应采用商用DNA提取试剂盒,按照说明书进行操作。
3.PCR反应体系
PCR反应体系应包括模板DNA、引物、酶、缓冲液等。引物的设计应基于中华泰勒虫的特异性序列,确保PCR反应的特异性。
4.PCR程序
PCR程序应包括预变性、变性、退火、延伸等步骤。具体程序如下:
预变性:95℃,5min
变性:95℃,30s
退火:55℃,30s
延伸:72℃,30s
循环30次
最终延伸:72℃,10min
5.结果判定
PCR反应结束后,应进行凝胶电泳分析,观察PCR产物的大小和数量。如果PCR产物与目标序列大小相符,且存在明显的特异性条带,则判定为阳性;否则判定为阴性。
相关标准:
GB/T 4789.40-2016 食品微生物学检验 沙门氏菌检验
GB/T 5009.33-2016 食品中亚硝酸盐的测定
GB/T 5009.37-2017 食品中总磷的测定
GB/T 5009.41-2003 食品中铅的测定
GB/T 5009.44-2017 食品中镉的测定