一、范围
本标准适用于养殖水体中氯霉素残留量的测定。

二、引用标准
GB/T 6682 分析化学实验室用水规格
GB/T 6688 分析化学实验室安全操作规程
GB/T 20378.2 水质样品制备 第2部分：水样的采集
GB/T 20378.3 水质样品制备 第3部分：水样的保存和运输
GB/T 20378.4 水质样品制备 第4部分：水样的处理

三、仪器设备和试剂
1. 高效液相色谱串联质谱仪
2. 水质纯化系统
3. 恒温振荡器
4. 离心机
5. 1 mL、2 mL、10 mL、50 mL离心管
6. 0.22 μm滤膜
7. 氯霉素标准品
8. 甲醇（色谱纯）
9. 乙腈（色谱纯）
10. 硝酸铵（分析纯）
11. 磷酸二氢钾（分析纯）
12. 磷酸氢二钠（分析纯）
13. 硫酸（分析纯）
14. 硫酸铵（分析纯）
15. 硫酸钠（分析纯）
16. 乙酸（分析纯）
17. 乙酸钠（分析纯）
18. 氢氧化钠（分析纯）
19. 氢氧化铵（分析纯）
20. 氢氧化钾（分析纯）
21. 氢氧化钙（分析纯）
22. 氢氧化钡（分析纯）
23. 氢氧化钴（分析纯）
24. 氢氧化镁（分析纯）
25. 氢氧化铜（分析纯）
26. 氢氧化锌（分析纯）
27. 氢氧化铝（分析纯）
28. 氢氧化钙-氢氧化钠缓冲液（pH=10.5）
29. 氢氧化钠-氢氧化铝缓冲液（pH=4.5）
30. 氢氧化钠-氢氧化铝缓冲液（pH=9.0）
31. 氢氧化钠-氢氧化铝缓冲液（pH=11.0）
32. 氢氧化钠-氢氧化铝缓冲液（pH=12.0）
33. 氢氧化钠-氢氧化铝缓冲液（pH=13.0）

四、样品的采集和处理
按照GB/T 20378.2和GB/T 20378.3的规定采集和处理样品。

五、操作步骤
1. 样品的制备
取适量样品，加入硝酸铵和磷酸二氢钾，用水调节pH至6.5-7.5，加入内标溶液，用乙腈提取，离心后过滤，取上清液进样。
2. 色谱条件
色谱柱：Agilent ZORBAX SB-C18（2.1 mm×50 mm，1.8 μm）
流动相：A相为0.1%乙酸水溶液，B相为乙腈
梯度程序：0-1.5 min，A相100%；1.5-2.5 min，A相从100%线性梯度至10%；2.5-3.5 min，A相10%；3.5-4.5 min，A相从10%线性梯度至100%；4.5-6.0 min，A相100%
流速：0.3 mL/min
柱温：40℃
进样量：5 μL
3. 质谱条件
离子源：电喷雾离子源（ESI）
离子极性：正离子模式
扫描方式：多反应监测（MRM）
气体温度：350℃
气体流量：10 L/min
毒物电压：-4.0 kV
碎片电压：-100 V
4. 定量方法
用氯霉素标准品制备系列浓度的标准曲线，测定样品中氯霉素的峰面积，根据标准曲线计算出样品中氯霉素的含量。

六、结果的计算与表达
样品中氯霉素的含量，按照下式计算：
C=（A-B）/a×V
其中，C为样品中氯霉素的含量，μg/L；
A为样品中氯霉素的峰面积；
B为内标的峰面积；
a为标准曲线的斜率；
V为样品的提取液体积，mL。

七、质量控制
1. 标准曲线的制备
用氯霉素标准品制备系列浓度的标准曲线，测定标准曲线的相关系数，相关系数应大于0.99。
2. 空白对照
每批样品应设置空白对照，用于检测仪器和试剂的污染情况。
3. 质控样品
每批样品应设置质控样品，用于检测分析方法的准确性和精密度。
4. 精密度和准确度
在同一天内，重复测定6个不同浓度的质控样品，计算相对标准偏差（RSD），RSD应小于15%。
5. 检出限和定量限
检出限和定量限的计算方法，参照GB/T 6682的规定。

八、报告内容
1. 样品的标识和来源；
2. 检测方法的名称和编号；
3. 检测结果，包括氯霉素的含量、检出限和定量限；
4. 质量控制的结果；
5. 分析人员的签名和日期。

相关标准
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