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一、范围
本标准适用于东部白松种源相关序列多态性（SRAP）分子鉴定实验方法。

二、引用标准
GB/T 191-2008 包装、装运、储存标志和标签的通用规定
GB/T 8170-2008 数字表示法和圆整规则
GB/T 12346-2006 生物技术术语
GB/T 19484.1-2004 分子生物学实验室生物安全通则 第1部分：基本要求
GB/T 19484.2-2004 分子生物学实验室生物安全通则 第2部分：物理性防护设施和设备
GB/T 19484.3-2004 分子生物学实验室生物安全通则 第3部分：实验操作规程
GB/T 19484.4-2004 分子生物学实验室生物安全通则 第4部分：生物安全评价

三、术语和定义
3.1 SRAP技术
SRAP技术是一种基于PCR扩增的分子标记技术，其特点是利用两个引物同时扩增基因组DNA中的两个不同区域，即SRAP引物对，从而获得多态性DNA片段。

3.2 种源
种源是指同一物种不同地理分布区域内的个体群体，其遗传背景和表现形态存在差异。

3.3 DNA提取
DNA提取是指从生物样品中提取出DNA分子的过程。

3.4 PCR扩增
PCR扩增是指利用聚合酶链式反应技术，通过引物特异性识别和扩增DNA分子的过程。

3.5 电泳分离
电泳分离是指利用电场作用，将DNA片段按照大小分离的过程。

3.6 数据分析
数据分析是指对PCR扩增产生的电泳图像进行解析和处理，得到分子标记的信息。

四、实验方法
4.1 样品采集
4.1.1 样品选择
选择生长健壮、无病虫害的东部白松个体作为研究对象，每个种源至少采集10个个体。

4.1.2 样品采集
采集样品时，应选择生长势旺盛、无病虫害的枝条，将其放入密封袋中，标注采集时间、地点、种源编号等信息。

4.2 DNA提取
4.2.1 样品处理
将采集的样品放入液氮中冷冻，然后将其研磨成粉末状，加入提取缓冲液，混匀后离心。

4.2.2 DNA提取
采用CTAB法提取DNA，提取后用TE溶液稀释至适宜浓度。

4.3 PCR扩增
4.3.1 引物设计
选择SRAP引物对，设计引物序列，合成引物。

4.3.2 PCR反应体系
将DNA模板、引物、dNTPs、Taq聚合酶等加入PCR反应管中，加入适量的ddH2O，进行PCR扩增。

4.3.3 PCR程序
PCR程序如下：
95℃预变性5min；
95℃变性30s；
50℃退火30s；
72℃延伸1min；
共30个循环；
72℃延伸10min；
4℃保持。

4.4 电泳分离
将PCR扩增产物进行电泳分离，根据分离结果进行数据分析。

五、实验结果分析
根据电泳图像，分析不同种源之间的遗传距离和遗传多样性等指标。

相关标准：
GB/T 12346-2006 生物技术术语
GB/T 19484.1-2004 分子生物学实验室生物安全通则 第1部分：基本要求
GB/T 19484.2-2004 分子生物学实验室生物安全通则 第2部分：物理性防护设施和设备
GB/T 19484.3-2004 分子生物学实验室生物安全通则 第3部分：实验操作规程
GB/T 19484.4-2004 分子生物学实验室生物安全通则 第4部分：生物安全评价