DB21/T 2826-2017
O型口蹄疫病毒RT-LAMP检测方法
发布时间:2017-11-16 实施时间:2017-12-16


O型口蹄疫是一种急性、高传染性的病毒性疾病,对牛、猪、羊等偶蹄类动物危害极大。为了及时、准确地检测O型口蹄疫病毒,保障动物健康和人类健康,制定了O型口蹄疫病毒RT-LAMP检测方法标准。

1.试验原理
RT-LAMP(Reverse Transcription Loop-mediated Isothermal Amplification)是一种新型的核酸扩增技术,具有快速、简便、高灵敏度、高特异性等优点。本方法采用RT-LAMP技术,通过特异性引物和酶的作用,在等温条件下扩增O型口蹄疫病毒的核酸,最终通过目视或荧光检测结果。

2.试剂和仪器设备
(1)试剂:包括RT-LAMP试剂盒、核酸提取试剂盒、阳性对照品、负性对照品等。
(2)仪器设备:包括PCR仪、荧光定量PCR仪、核酸提取仪等。

3.试验步骤
(1)样品处理:采集样品,提取核酸。
(2)RT-LAMP扩增:将提取的核酸加入RT-LAMP试剂盒,进行等温扩增。
(3)结果判定:通过目视或荧光检测结果,判断样品是否为O型口蹄疫病毒阳性。

4.结果判定
(1)目视判定:阳性样品呈现淡黄色或浅绿色,阴性样品呈现橙色或黄色。
(2)荧光检测:阳性样品荧光值高于阈值,阴性样品荧光值低于阈值。

5.质量控制
(1)阳性对照品:用于验证试剂盒和仪器设备的灵敏度和特异性。
(2)负性对照品:用于验证试剂盒和仪器设备的无污染性。

相关标准:
GB/T 22470-2008 动物疫病检验通用技术要求
GB/T 22471-2008 动物疫病检验实验室建设规范
GB/T 22472-2008 动物疫病检验质量控制规范
GB/T 22473-2008 动物疫病检验报告编制规范
GB/T 22474-2008 动物疫病检验结果判定规范