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绵羊肺腺瘤病是由肺腺瘤病毒引起的一种急性传染病,主要危害绵羊。该病毒具有强烈的传染性和致死性,对绵羊养殖业造成了严重的经济损失。因此,对绵羊肺腺瘤病的检测方法进行研究和制定标准具有重要意义。
本标准采用PCR方法进行绵羊肺腺瘤病的检测。具体步骤如下:
1.样品采集
采集肺组织、肺淋巴结、肺泡灌洗液等样品,避免污染和交叉感染。
2.DNA提取
将样品进行粉碎,加入蛋白酶K和SDS等试剂,进行蛋白酶消化和脱脂,然后进行酚/氯仿法或商用DNA提取试剂盒提取DNA。
3.PCR反应体系
PCR反应体系包括PCR反应缓冲液、dNTPs、引物、Taq DNA聚合酶、模板DNA等。具体反应体系如下:
PCR反应缓冲液 5μL
dNTPs 0.2μL
引物 0.5μL
Taq DNA聚合酶 0.2μL
模板DNA 2μL
ddH2O 2.1μL
4.PCR程序
PCR程序包括预变性、变性、退火、延伸等步骤。具体程序如下:
预变性 94℃ 5min
变性 94℃ 30s
退火 55℃ 30s
延伸 72℃ 30s
共循环30次
最终延伸 72℃ 10min
5.PCR产物检测
将PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳,观察PCR产物的大小和数量,判断是否存在绵羊肺腺瘤病毒。
本标准的实施可以提高绵羊肺腺瘤病的检测效率和准确性,为绵羊养殖业的发展提供有力的技术支持。
相关标准:
1. DB15/T 535-2013 绵羊肺腺瘤病的检测方法 ELISA法
2. DB15/T 537-2013 绵羊肺腺瘤病的检测方法 病理学检测法
3. GB/T 4789.40-2016 食品微生物学检验 肉类及其制品
4. GB/T 22470-2008 食品安全国家标准 食品中基因改造成分的检测方法
5. GB/T 5009.33-2016 食品中亚硝酸盐的测定