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红豆草是一种常见的植物，含有丰富的缩合单宁，具有多种生物活性，如抗氧化、抗炎、抗肿瘤等。因此，从红豆草中提取纯化缩合单宁具有重要的研究和应用价值。本标准旨在规范从红豆草中提取纯化缩合单宁的方法，以保证提取的缩合单宁的质量和稳定性。

1.范围
本标准适用于从红豆草中提取纯化缩合单宁的方法。

2.设备和试剂
2.1 设备
2.1.1 超声波提取仪
2.1.2 离心机
2.1.3 水浴恒温振荡器
2.1.4pH计
2.1.5 紫外分光光度计
2.1.6 液相色谱仪
2.1.7 旋光仪
2.1.8 精密天平
2.1.9 玻璃仪器和塑料仪器

2.2 试剂
2.2.1 甲醇
2.2.2 乙酸
2.2.3 氢氧化钠
2.2.4 氯仿
2.2.5 乙醇
2.2.6 水
2.2.7 硫酸
2.2.8 氢氯酸
2.2.9 乙酸乙酯
2.2.10 乙酸乙酯-甲醇（1:1，体积比）
2.2.11 乙酸乙酯-乙醇（1:1，体积比）
2.2.12 乙酸乙酯-正丁醇（1:1，体积比）
2.2.13 乙酸乙酯-正丁醇-乙酸（5:4:1，体积比）
2.2.14 乙酸乙酯-正丁醇-乙酸-水（5:4:1:1，体积比）

3.方法
3.1 提取
3.1.1 取红豆草粉末10 g，加入甲醇100 mL中，超声提取30 min，过滤，取滤液。
3.1.2 将滤液浓缩至干燥，加入乙酸10 mL，水50 mL，pH调至2-3，用氯仿3次萃取，合并氯仿层，用硫酸除去水分，得到氯仿提取物。
3.1.3 将氯仿提取物加入乙酸乙酯-甲醇（1:1，体积比）中，用水浴恒温振荡器震荡30 min，离心分离，取上层液体。
3.1.4 将上层液体加入乙酸乙酯-乙醇（1:1，体积比）中，用水浴恒温振荡器震荡30 min，离心分离，取上层液体。
3.1.5 将上层液体加入乙酸乙酯-正丁醇（1:1，体积比）中，用水浴恒温振荡器震荡30 min，离心分离，取上层液体。
3.1.6 将上层液体加入乙酸乙酯-正丁醇-乙酸（5:4:1，体积比）中，用水浴恒温振荡器震荡30 min，离心分离，取上层液体。
3.1.7 将上层液体加入乙酸乙酯-正丁醇-乙酸-水（5:4:1:1，体积比）中，用水浴恒温振荡器震荡30 min，离心分离，取上层液体。
3.1.8 将上层液体浓缩至干燥，得到纯化的缩合单宁。

3.2 分离
3.2.1 将纯化的缩合单宁溶于乙酸乙酯中，用液相色谱仪进行分离。

3.3 纯化
3.3.1 将分离得到的缩合单宁溶于乙酸乙酯中，用旋光仪检测旋光度，用紫外分光光度计检测吸收峰，用精密天平检测质量，得到纯化的缩合单宁。

4.质量控制
4.1 纯度检测
4.1.1 用液相色谱仪检测纯化的缩合单宁的纯度。
4.1.2 用紫外分光光度计检测纯化的缩合单宁的吸收峰。
4.1.3 用旋光仪检测纯化的缩合单宁的旋光度。

4.2 含量测定
4.2.1 用紫外分光光度计测定纯化的缩合单宁的含量。

5.结果报告
5.1 报告中应包括以下内容：
5.1.1 红豆草的来源和采集时间；
5.1.2 提取、分离、纯化的方法和步骤；
5.1.3 纯化的缩合单宁的质量控制结果；
5.1.4 纯化的缩合单宁的含量测定结果。

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