饲料中土霉素、四环素、金霉素是常见的抗生素，它们的存在会对动物的健康产生影响。因此，对饲料中土霉素、四环素、金霉素的测定显得尤为重要。本标准规定了饲料中土霉素、四环素、金霉素的测定方法，以保证饲料中这些抗生素的含量符合国家标准。

1. 原理
本标准采用高效液相色谱法（HPLC）测定饲料中土霉素、四环素、金霉素的含量。样品经提取、净化后，采用HPLC进行分离和检测，通过比对样品与标准品的峰面积，计算出样品中土霉素、四环素、金霉素的含量。

2. 仪器和设备
（1）高效液相色谱仪
（2）色谱柱：C18色谱柱
（3）电子天平
（4）超声波清洗器
（5）离心机
（6）pH计

3. 试剂和材料
（1）土霉素、四环素、金霉素标准品
（2）甲醇
（3）乙腈
（4）乙酸
（5）乙酸钠
（6）硫酸
（7）氢氧化钠
（8）硝酸钠
（9）硝酸银
（10）去离子水
（11）饲料样品

4. 操作步骤
（1）样品制备
将饲料样品粉碎并筛选，取1g样品加入50mL离子水中，超声波清洗10min，离心10min，取上清液过滤，取1mL过滤液加入10mL甲醇中，超声波清洗10min，离心10min，取上清液过滤，即为样品。

（2）标准曲线制备
取土霉素、四环素、金霉素标准品各0.1mg/mL，分别加入甲醇中制成1mg/mL的标准溶液，再分别稀释成0.1mg/mL、0.01mg/mL、0.001mg/mL、0.0001mg/mL的标准溶液，用HPLC检测各浓度标准溶液的峰面积，绘制标准曲线。

（3）样品检测
将样品注入HPLC仪器中，按照标准曲线计算出土霉素、四环素、金霉素的含量。

5. 结果计算
样品中土霉素、四环素、金霉素的含量，按照标准曲线计算出来，单位为mg/kg。

6. 精密度和准确度
本标准的精密度和准确度符合GB/T 6682的要求。

相关标准
GB/T 6682-2008 分析化学实验室水质要求和检验方法
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