一、范围
本标准适用于测定养殖水体中孔雀石绿残留量。

二、引用标准
GB/T 6682 分析化学实验室用水规格
GB/T 6688 分析化学实验室安全操作规程
GB/T 20378.2 水质-生物毒性试验-第2部分：细菌性毒性试验
GB/T 20378.3 水质-生物毒性试验-第3部分：藻类毒性试验
GB/T 20378.4 水质-生物毒性试验-第4部分：水生昆虫毒性试验

三、原理
样品经提取、净化后，采用液相色谱-串联质谱法进行检测。

四、仪器设备和试剂
4.1 仪器设备
液相色谱-串联质谱仪
离心机
超声波清洗器
电子天平
移液器
4.2 试剂
甲醇（色谱纯）
乙腈（色谱纯）
水（色谱纯）
乙酸（色谱纯）
孔雀石绿标准品（纯度≥98%）

五、样品处理
5.1 取样
按照GB/T 20378.2、GB/T 20378.3、GB/T 20378.4的要求采集样品。
5.2 样品制备
将样品加入离心管中，加入甲醇，超声提取，离心，取上清液，加入乙酸，用固相萃取柱净化，用甲醇-水溶液洗脱，浓缩至干燥，加入甲醇重溶，过滤后即可检测。

六、操作步骤
6.1 仪器条件
详见仪器说明书。
6.2 标准曲线的制备
称取孔雀石绿标准品，加入甲醇中制备成1mg/mL的标准溶液，再用甲醇稀释得到一系列不同浓度的标准溶液，进行检测，绘制标准曲线。
6.3 样品检测
将样品注入液相色谱-串联质谱仪中，按照仪器说明书进行检测，根据标准曲线计算出孔雀石绿的残留量。

七、结果计算与表达
计算公式：
C=（A-B）/a
其中，C为孔雀石绿的残留量，A为样品的峰面积，B为空白的峰面积，a为标准曲线的斜率。
结果应保留两位小数，单位为μg/kg。

八、质量控制
8.1 仪器的校准和质量控制
按照仪器说明书进行校准和质量控制。
8.2 方法的精密度和准确度
在同一实验室内，重复进行6次测定，计算相对标准偏差（RSD），RSD应小于10%。
加入不同浓度的孔雀石绿标准品，进行回收率实验，回收率应在80%~120%之间。

九、实验报告
实验报告应包括以下内容：
9.1 样品的来源、性质和处理方法；
9.2 仪器设备和试剂的使用情况；
9.3 操作步骤和结果计算；
9.4 精密度和准确度的评价；
9.5 结论。

相关标准
GB/T 6682 分析化学实验室用水规格
GB/T 6688 分析化学实验室安全操作规程
GB/T 20378.2 水质-生物毒性试验-第2部分：细菌性毒性试验
GB/T 20378.3 水质-生物毒性试验-第3部分：藻类毒性试验
GB/T 20378.4 水质-生物毒性试验-第4部分：水生昆虫毒性试验