孔雀石绿是一种广泛应用于畜禽养殖中的抗菌药物，但其残留会对人体健康造成危害。为了保障公众健康，需要对水和沉积物中孔雀石绿及其代谢物残留量进行监测。本标准旨在规定一种准确、可靠的测定方法。

1 范围
本标准适用于水和沉积物中孔雀石绿及其代谢物残留量的测定。

2 原理
样品经提取、净化后，采用液相色谱-串联质谱法进行分析。

3 试剂和材料
3.1 甲醇（色谱纯）
3.2 乙腈（色谱纯）
3.3 硝酸钠（分析纯）
3.4 硫酸（分析纯）
3.5 氢氧化钠（分析纯）
3.6 氯仿（色谱纯）
3.7 乙酸乙酯（色谱纯）
3.8 氨水（分析纯）
3.9 氢氯酸（分析纯）
3.10 孔雀石绿和其代谢物的纯品
3.11 水：经纯化处理或蒸馏后使用
3.12 沉积物：经过干燥、研磨、筛分后使用

4 仪器设备
4.1 液相色谱-串联质谱仪
4.2 恒温振荡器
4.3 离心机
4.4 超声波清洗器
4.5 恒温水浴器
4.6 电子天平
4.7 称量瓶、烧杯、滤纸等常规实验室器材

5 样品处理
5.1 水样
取适量水样，加入硝酸钠和硫酸，进行酸化处理。然后加入氢氧化钠和氯仿，进行液-液萃取。将有机相转移到离心管中，离心分离。取上层有机相，加入氯仿和乙酸乙酯，进行液-液萃取。将有机相转移到离心管中，离心分离。取上层有机相，用氮气吹干，加入甲醇和氨水，进行洗脱。最后用甲醇稀释至一定体积，即可进行分析。

5.2 沉积物样
取适量沉积物样，加入水和氢氧化钠，进行超声波处理。然后加入氯仿和乙酸乙酯，进行液-液萃取。将有机相转移到离心管中，离心分离。取上层有机相，用氮气吹干，加入甲醇和氨水，进行洗脱。最后用甲醇稀释至一定体积，即可进行分析。

6 操作步骤
6.1 仪器预热
将液相色谱-串联质谱仪预热至稳定状态。

6.2 样品制备
按照5.1和5.2的方法制备样品。

6.3 样品分析
将制备好的样品注入液相色谱-串联质谱仪进行分析。

7 结果计算
根据孔雀石绿和其代谢物的峰面积，结合标准曲线，计算出样品中孔雀石绿和其代谢物的残留量。

8 精密度和准确度
本方法的相对标准偏差应小于10%。

9 检出限和定量限
本方法的检出限和定量限分别为0.5μg/kg和1.5μg/kg。

相关标准
GB/T 5009.199-2017 食品中孔雀石绿和代谢物的测定 高效液相色谱-串联质谱法
GB/T 31604.49-2016 食品接触材料及制品中孔雀石绿和代谢物的测定 液相色谱-串联质谱法
GB/T 31604.50-2016 食品接触材料及制品中孔雀石绿和代谢物的测定 气相色谱-质谱法
GB/T 31604.51-2016 食品接触材料及制品中孔雀石绿和代谢物的测定 气相色谱-质谱法
GB/T 31604.52-2016 食品接触材料及制品中孔雀石绿和代谢物的测定 液相色谱-紫外检测法