ISO/TS 19006:2016
Nanotechnologies — 5-(and 6)-Chloromethyl-2’,7’ Dichloro-dihydrofluorescein diacetate (CM-H2DCF-DA) assay for evaluating nanoparticle-induced intracellular reactive oxygen species (ROS) production in RAW 264.7 macrophage cell line
发布时间:2016-07-18 实施时间:


纳米技术是一种新兴的技术,已经被广泛应用于医学、生物学、材料科学等领域。然而,纳米颗粒的毒性和生物相容性一直是人们关注的问题。为了评估纳米颗粒的毒性和生物相容性,需要开发一种可靠的方法来测量纳米颗粒对细胞的影响。

ISO/TS 19006:2016是一项用于评估纳米颗粒诱导的细胞内活性氧(ROS)产生的标准。该标准使用RAW 264.7巨噬细胞系和5-(和6)-氯甲基-2',7'-二氯二氢荧光素二乙酸酯(CM-H2DCF-DA)试剂,通过测量细胞内ROS的水平来评估纳米颗粒对细胞的影响。

CM-H2DCF-DA是一种荧光探针,可以被细胞摄取并在细胞内水解成5-(和6)-氯甲基-2',7'-二氯二氢荧光素(CM-DCF)。CM-DCF可以被ROS氧化成高度荧光的产物,因此可以用来测量细胞内ROS的水平。在ISO/TS 19006:2016中,使用CM-H2DCF-DA试剂来测量RAW 264.7巨噬细胞系中纳米颗粒诱导的ROS产生。

该标准的实验步骤如下:

1. 培养RAW 264.7巨噬细胞系并将其分配到96孔板中。
2. 将纳米颗粒添加到细胞中并孵育一定时间。
3. 向细胞中加入CM-H2DCF-DA试剂并孵育一定时间。
4. 使用荧光显微镜或流式细胞术测量细胞内CM-DCF的荧光强度。
5. 分析荧光数据以确定纳米颗粒诱导的ROS产生水平。

ISO/TS 19006:2016的实验结果可以用于评估纳米颗粒的毒性和生物相容性。如果纳米颗粒诱导了细胞内ROS的产生,说明纳米颗粒可能对细胞造成了损伤。因此,该标准可以用于评估纳米颗粒的安全性和生物相容性。

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