一、范围
本标准适用于生物样品中敌鼠、溴敌隆、溴氰菊酯、毒死蜱、戊鼠钠和氟乐灵等六种抗凝血杀鼠剂的高效液相色谱检验方法。

二、仪器设备
1. 高效液相色谱仪：具有紫外检测器和荧光检测器。
2. 色谱柱：C18色谱柱，5μm，4.6mm×250mm。
3. 称量仪：精度为0.1mg的电子天平。
4. 超声波清洗仪：功率为100W，频率为40kHz。

三、试剂和材料
1. 甲醇：色谱纯。
2. 乙腈：色谱纯。
3. 磷酸二氢钾：分析纯。
4. 磷酸氢二钠：分析纯。
5. 纯水：电阻率大于18MΩ/cm。
6. 敌鼠、溴敌隆、溴氰菊酯、毒死蜱、戊鼠钠和氟乐灵标准品：纯度大于98%。
7. 生物样品：如血液、尿液等。

四、操作步骤
1. 标准曲线的制备
(1) 分别取敌鼠、溴敌隆、溴氰菊酯、毒死蜱、戊鼠钠和氟乐灵标准品，精密称取，加入10ml容量瓶中，用甲醇稀释至一定浓度。
(2) 取不同浓度的标准品溶液，注入色谱仪进行检测，绘制标准曲线。

2. 样品的制备
(1) 取生物样品，加入10ml离心管中。
(2) 加入适量的甲醇，超声波清洗10分钟，离心10分钟，取上清液。
(3) 取上清液，用甲醇稀释至一定浓度。

3. 色谱条件
(1) 流动相A：0.05mol/L磷酸二氢钾水溶液，pH=3.0。
(2) 流动相B：乙腈。
(3) 梯度洗脱：0-5min，A：B=80:20；5-10min，A：B=60:40；10-15min，A：B=40:60；15-20min，A：B=20:80；20-25min，A：B=0:100；25-30min，A：B=0:100。
(4) 流速：1.0ml/min。
(5) 柱温：30℃。
(6) 检测波长：敌鼠、溴敌隆、溴氰菊酯、毒死蜱和戊鼠钠为254nm，氟乐灵为280nm。

4. 检测方法
(1) 取样品溶液，注入色谱仪进行检测。
(2) 根据标准曲线计算样品中敌鼠、溴敌隆、溴氰菊酯、毒死蜱、戊鼠钠和氟乐灵的含量。

五、结果计算
样品中敌鼠、溴敌隆、溴氰菊酯、毒死蜱、戊鼠钠和氟乐灵的含量，按照标准曲线计算。

六、质量控制
1. 标准品的制备和保存应符合相关规定。
2. 样品的制备应避免污染。
3. 每个样品应进行两次检测，结果的相对标准偏差应小于10%。

七、报告内容
1. 样品编号、名称、检测日期、检测人员等基本信息。
2. 检测结果及单位。
3. 检测方法及仪器设备。
4. 质量控制情况。

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