总硒是一种重要的环境污染物，对人体健康和生态环境都有一定的危害。因此，对水中总硒的测定具有重要的意义。本标准采用3,3＇-二氨基联苯胺分光光度法测定水样中总硒的含量。

1. 原理
将水样中的硒还原为Se（IV），再与3,3＇-二氨基联苯胺在酸性介质中发生偶联反应，生成紫色化合物，其吸收峰位在660nm处。根据吸光度与硒的浓度呈线性关系，可计算出水样中总硒的含量。

2. 试剂和仪器
2.1 试剂
（1）硝酸铁（Fe(NO3)3）：AR级。
（2）硫酸（H2SO4）：AR级。
（3）氢氧化钠（NaOH）：AR级。
（4）3,3＇-二氨基联苯胺：AR级。
（5）硒酸钠（Na2SeO4）：标准物质。
（6）蒸馏水：制备用。
2.2 仪器
（1）分光光度计：波长范围为200nm~900nm，分辨率为1nm。
（2）恒温水浴器：可控制温度在25℃±1℃。
（3）电热板：可控制温度在100℃±5℃。

3. 样品处理
3.1 采样
按照《水和废水监测分析方法》（GB/T 5750）的规定采集水样，并在4℃以下保存。

3.2 样品预处理
（1）取适量水样，加入硝酸铁和硫酸，使水样中的硒被还原为Se（IV）。
（2）加入氢氧化钠调节pH值，使其在2~3之间。
（3）加入3,3＇-二氨基联苯胺，使其与Se（IV）发生偶联反应，生成紫色化合物。
（4）加入蒸馏水稀释至定容。

4. 操作步骤
4.1 标准曲线的绘制
（1）取一系列不同浓度的硒酸钠标准溶液，分别加入试管中。
（2）按照样品处理方法处理标准溶液，得到一系列含硒量不同的水样。
（3）用分光光度计测定各水样的吸光度值，绘制标准曲线。

4.2 样品测定
（1）按照样品处理方法处理待测水样。
（2）用分光光度计测定水样的吸光度值。
（3）根据标准曲线计算出水样中总硒的含量。

5. 结果计算
5.1 标准曲线的计算
（1）用标准溶液绘制标准曲线，计算出吸光度与硒的浓度之间的线性关系。
（2）标准曲线的线性范围为0~1.0mg/L，相关系数不小于0.999。

5.2 样品测定结果的计算
（1）用分光光度计测定样品的吸光度值。
（2）根据标准曲线计算出样品中总硒的含量。
（3）样品的测定结果应在标准曲线的线性范围内，否则应重新稀释样品或重新测定。

6. 精密度和准确度
6.1 精密度
同一水样在同一实验室内，连续测定6次，相对标准偏差不大于5%。

6.2 准确度
（1）加入已知量的硒酸钠标准溶液，按照样品处理方法处理，测定其含硒量，与加入量的误差不大于5%。
（2）对于未知样品，应采用标准加入法进行测定。

相关标准
1. GB/T 5750-2018 水和废水监测分析方法
2. HJ 637-2012 水质 重金属的测定 石墨炉原子吸收光谱法
3. HJ 535-2009 水质 氨氮的测定 气相色谱法
4. HJ 646-2013 水质 总磷的测定 钼酸酸化分光光度法
5. HJ 535-2009 水质 氨氮的测定 气相色谱法