禽白血病是一种由禽白血病病毒引起的慢性传染病,对家禽养殖业造成了严重的经济损失。禽白血病病毒p27抗原酶联免疫吸附试验是检测禽白血病病毒感染的一种常用方法,本标准旨在规范该检测方法的操作流程和技术要求,以确保检测结果的准确性和可靠性。
1. 试剂和仪器
1.1 试剂
本试验所需试剂包括:酶标板、标准品、检测样品、酶标板洗涤缓冲液、酶标板稀释液、酶标板显色液、酶标板停止液、PBS缓冲液、BSA、Tween-20、H2O2、TMB底物等。
1.2 仪器
本试验所需仪器包括:微量移液器、酶标仪、洗板机等。
2. 操作步骤
2.1 标准品的制备
将标准品加入PBS缓冲液中制成不同浓度的标准品溶液。
2.2 样品的处理
将检测样品加入PBS缓冲液中,离心后取上清液进行检测。
2.3 酶标板的涂覆
将酶标板加入p27抗原单克隆抗体,孵育后加入BSA进行阻断,再加入标准品和检测样品,孵育后洗涤。
2.4 酶标板的检测
加入p27抗原酶联免疫吸附试剂,孵育后洗涤,加入显色液,孵育后加入停止液,用酶标仪测定吸光度值。
2.5 结果的判定
根据标准品的吸光度值绘制标准曲线,根据检测样品的吸光度值计算出样品中p27抗原的含量。
3. 结果的解释
3.1 样品的判定
样品的吸光度值大于或等于阈值时,判定为阳性;小于阈值时,判定为阴性。
3.2 结果的报告
报告样品的p27抗原含量及阳性或阴性判定结果。
4. 质量控制
4.1 阳性对照品的制备
制备含有p27抗原的阳性对照品。
4.2 阳性对照品的检测
每次试验中加入阳性对照品进行检测,确保试验的准确性和可靠性。
相关标准
GB/T 22470-2008 禽白血病病毒检验方法
NY/T 1491-2007 禽白血病病毒抗体酶联免疫吸附试验方法
NY/T 1492-2007 禽白血病病毒抗体中和试验方法
NY/T 1493-2007 禽白血病病毒核酸检测方法
NY/T 1494-2007 禽白血病病毒分离鉴定方法