饲料中添加貂、狐、貉等动物源性成分是一种常见的行业现象,但是这些动物源性成分可能会对人体健康造成潜在的威胁。因此,对饲料中是否含有这些动物源性成分进行检测是非常必要的。
本标准采用实时荧光PCR法进行定性检测。实时荧光PCR法是一种高灵敏度、高特异性的检测方法,可以快速、准确地检测出饲料中是否含有貂、狐、貉等动物源性成分。
具体操作步骤如下:
1. 样品制备:将饲料样品加入适量的水中,混合均匀后取1g样品,加入10mL的PBS缓冲液中,振荡混合,离心沉淀,弃去上清液,留下沉淀物。
2. DNA提取:将沉淀物加入适量的DNA提取试剂中,按照试剂盒说明书进行DNA提取。
3. PCR扩增:将提取的DNA加入PCR反应体系中,进行PCR扩增。PCR反应体系的组成如下:
模板DNA 2μL
10×PCR Buffer 2.5μL
MgCl2 1.5μL
dNTPs 0.5μL
Forward primer 0.5μL
Reverse primer 0.5μL
Taq DNA polymerase 0.2μL
SYBR Green I 0.3μL
ddH2O 12μL
PCR反应条件如下:
预变性 95℃ 5min
变性 95℃ 30s
退火 55℃ 30s
延伸 72℃ 30s
循环步骤2-4 40次
终止延伸 72℃ 10min
4. 结果分析:将PCR扩增产物进行凝胶电泳,观察是否有目标条带出现。如果有目标条带出现,则说明样品中含有貂、狐、貉等动物源性成分。
相关标准
GB/T 5009.268-2016 食品中动物源性成分的检验
GB/T 22388-2008 食品中动物源性成分的检测
GB/T 22387-2008 食品中动物源性成分的定性检测
GB/T 22386-2008 食品中动物源性成分的定量检测
GB/T 22385-2008 食品中动物源性成分的鉴定