：
一、范围
本标准适用于咖啡及制品中葫芦巴碱的测定。

二、引用标准
GB/T 6682-2008 分析化学实验室水和气的纯度试验方法
GB/T 8170-2008 数字表示法和圆整规则
GB/T 13078-2007 食品中添加剂的通用规定
GB/T 14683-2011 食品中添加剂的标签标识和使用

三、原理
样品经过提取、过滤、稀释后，采用高效液相色谱法进行测定。样品中的葫芦巴碱在特定条件下与反相色谱柱中的固定相发生相互作用，通过梯度洗脱，利用紫外检测器检测葫芦巴碱的峰面积，计算出样品中葫芦巴碱的含量。

四、仪器设备和试剂
4.1 仪器设备
高效液相色谱仪、紫外检测器、反相色谱柱、移液器、瓶塞、瓶盖、量筒、瓶子、滤纸、离心管、离心机、pH计等。
4.2 试剂
甲醇、乙腈、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、氢氧化钠、硫酸、硝酸、氯化钠等。

五、样品处理
5.1 样品的准备
将样品粉末称取0.5g，加入50mL锥形瓶中，加入10mL甲醇，振荡10min，离心10min，取上清液过滤，取1mL上清液加入10mL量筒中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，得到样品溶液。
5.2 样品的提取
将样品溶液取1mL，加入10mL离心管中，加入1mL磷酸二氢钾溶液，加入1mL乙腈，振荡10min，离心10min，取上清液过滤，得到提取液。
5.3 样品的稀释
将提取液取1mL，加入10mL量筒中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，得到样品溶液。

六、操作步骤
6.1 仪器的预备
6.2 样品的处理
6.3 样品的测定
6.4 数据的处理

七、计算结果
样品中葫芦巴碱的含量，按下式计算：
C=V×C1/V1
式中：
C——样品中葫芦巴碱的含量，mg/kg；
V——样品溶液的体积，mL；
C1——葫芦巴碱的标准溶液浓度，mg/mL；
V1——葫芦巴碱的标准溶液加入样品溶液的体积，mL。

八、结果报告
报告样品中葫芦巴碱的含量，保留两位小数，单位为mg/kg。

相关标准：
GB/T 6682-2008 分析化学实验室水和气的纯度试验方法
GB/T 13078-2007 食品中添加剂的通用规定
GB/T 14683-2011 食品中添加剂的标签标识和使用
GB/T 5009.33-2016 食品中咖啡因的测定 高效液相色谱法
GB/T 5009.34-2016 食品中咖啡酸的测定 高效液相色谱法