蜂胶是蜜蜂采集植物芽、树皮、树脂等物质，经过加工后形成的一种胶状物质。蜂胶具有抗菌、抗炎、抗氧化等多种功效，被广泛应用于保健品、化妆品等领域。其中，咖啡酸苯乙酯是蜂胶中的一种重要成分，具有抗氧化、抗炎、抗菌等功效。因此，对蜂胶中咖啡酸苯乙酯的测定具有重要意义。

本标准采用液相色谱-串联质谱法进行测定。具体操作步骤如下：

1. 仪器和试剂

（1）液相色谱-串联质谱仪：具有质谱检测器和色谱柱。

（2）色谱柱：使用C18色谱柱，长度为150mm，内径为2.1mm，颗粒大小为5μm。

（3）移液器：1mL、10mL。

（4）离心机：最高转速为12000r/min。

（5）超纯水：用于制备溶液。

（6）甲醇：色谱纯。

（7）乙腈：色谱纯。

（8）咖啡酸苯乙酯标准品：纯度为98%以上。

2. 样品制备

（1）取蜂胶样品1g，加入10mL甲醇中，超声处理30min，离心10min，取上清液。

（2）将上清液转移至10mL移液器中，加入甲醇补足至刻度，摇匀。

（3）用0.22μm滤膜过滤，取滤液进样。

3. 色谱条件

（1）流动相A：0.1%甲酸水溶液。

（2）流动相B：乙腈。

（3）梯度洗脱条件：0-2min，5% B；2-6min，5%-95% B；6-8min，95% B；8-8.1min，95%-5% B；8.1-10min，5% B。

（4）流速：0.3mL/min。

（5）柱温：30℃。

（6）进样量：5μL。

4. 质谱条件

（1）离子源：电喷雾离子源（ESI）。

（2）离子极性：正离子模式。

（3）碎片电压：30V。

（4）扫描方式：多反应监测（MRM）。

（5）监测离子对：咖啡酸苯乙酯（m/z 197.1→163.1）。

5. 结果计算

（1）用咖啡酸苯乙酯标准品制备不同浓度的标准曲线。

（2）用标准曲线计算样品中咖啡酸苯乙酯的含量。

相关标准
GB/T 5009.33-2017 食品中咖啡酸苯乙酯的测定 高效液相色谱法
GB/T 22251-2008 蜂胶
GB/T 5009.230-2003 食品中蜂胶的测定
GB/T 22250-2008 蜂胶口服液
GB/T 22249-2008 蜂胶胶囊