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甘蔗是我国重要的经济作物之一，但由于宿根矮化病菌的侵害，导致甘蔗产量大幅下降。因此，对甘蔗病原菌的检测显得尤为重要。本标准旨在规范甘蔗病原菌宿根矮化病菌的环介导等温扩增检测方法，以提高检测的准确性和可靠性。

1.范围
本标准适用于甘蔗病原菌宿根矮化病菌的环介导等温扩增检测方法。

2.试剂和材料
2.1 环介导等温扩增试剂盒
2.2 DNA提取试剂盒
2.3 甘蔗样品
2.4 离心管、PCR管、PCR板、PCR仪等

3.方法
3.1 样品处理
将甘蔗样品取1g，加入2mL的DNA提取试剂，混匀后离心，取上清液，加入等体积的异丙醇，混匀后离心，将上清液倒掉，加入70%的乙醇洗涤，离心后将上清液倒掉，将沉淀干燥后加入50μL的去离子水中，混匀后即可。

3.2 PCR扩增
将PCR管中加入10μL的DNA提取液，加入10μL的环介导等温扩增试剂盒中的反应液，混匀后放入PCR仪中进行扩增，扩增条件为：50℃反应30min，95℃反应5min，然后进行40个循环，每个循环包括95℃反应10s，60℃反应30s，72℃反应30s。

3.3 结果判定
扩增结束后，将PCR管中的反应液进行凝胶电泳，观察扩增产物的大小和数量，判断是否存在宿根矮化病菌。

4.结果分析
4.1 阳性结果：扩增产物大小为约300bp，说明样品中存在宿根矮化病菌。
4.2 阴性结果：未扩增出目标产物，说明样品中不存在宿根矮化病菌。

5.质量控制
5.1 采用阳性对照和阴性对照进行质量控制。
5.2 阳性对照：使用已知含有宿根矮化病菌的样品作为阳性对照。
5.3 阴性对照：使用无宿根矮化病菌的样品作为阴性对照。

相关标准：
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