NY/T 2471-2013
番茄品种鉴定技术规程 Indel分子标记法
发布时间:2013-12-12 实施时间:2014-04-01


番茄是一种重要的蔬菜作物,其品种繁多,形态差异较大,品质特征也各不相同。为了保护和利用好番茄的种质资源,需要对番茄品种进行鉴定。Indel分子标记法是一种基于DNA序列差异的分子标记方法,具有高度的特异性和稳定性,已经广泛应用于植物品种鉴定和种质资源鉴定。

1. 适用范围
本标准适用于番茄品种鉴定和种质资源鉴定。

2. 样品的采集和处理
2.1 样品的采集
样品采集应选择健康、生长良好、代表性强的植株,采集新鲜叶片或嫩茎,避免采集老化、病虫害或受伤的组织。
2.2 样品的处理
样品采集后应立即放入冰箱或液氮中保存,避免样品的DNA降解。样品的DNA提取应在24小时内完成。

3. DNA的提取
3.1 提取试剂的配制
根据实验室的具体情况,选择适合的DNA提取试剂,按照说明书中的方法配制。
3.2 样品的研磨和裂解
将采集的样品放入2ml离心管中,加入适量的提取缓冲液和玻璃珠,用高速匀浆机研磨至组织完全裂解。
3.3 DNA的提取
按照试剂盒说明书中的方法进行DNA的提取和纯化。

4. PCR扩增
4.1 PCR反应体系的配制
根据实验室的具体情况,选择适合的PCR试剂盒,按照说明书中的方法配制PCR反应体系。
4.2 PCR反应条件的设置
根据试剂盒说明书中的方法设置PCR反应条件,包括温度、时间和循环次数等。
4.3 PCR产物的检测
将PCR产物进行电泳分析,根据PCR产物的大小和带型进行品种鉴定。

5. 电泳分析
5.1 准备电泳仪和琼脂糖凝胶
根据实验室的具体情况,选择适合的电泳仪和琼脂糖凝胶,按照说明书中的方法进行准备。
5.2 样品的加样和电泳
将PCR产物加入琼脂糖凝胶槽中,进行电泳分析,根据PCR产物的大小和带型进行品种鉴定。

相关标准
GB/T 20481-2006 植物遗传资源采集规范
GB/T 20482-2006 植物遗传资源保存规范
GB/T 20483-2006 植物遗传资源鉴定规范
GB/T 20484-2006 植物遗传资源分类规范
GB/T 20485-2006 植物遗传资源信息管理规范