番茄溃疡病菌是一种重要的植物病原菌,能够引起番茄、辣椒、茄子等作物的病害。为了保障农业生产和国际贸易安全,需要对番茄溃疡病菌进行检疫检测和鉴定。本标准就是为了规范番茄溃疡病菌的检测和鉴定方法。
1. 生物学特性
番茄溃疡病菌是一种革兰氏阴性菌,属于假单胞菌科。菌体为短杆状,无芽胞,无荚膜,无胶囊。在营养琼脂平板上生长缓慢,菌落呈灰白色,表面光滑,边缘整齐。在培养基中含有葡萄糖时,菌落中心会出现凹陷,形成“溃疡”状。番茄溃疡病菌能够利用葡萄糖、果糖、蔗糖等多种碳源,能够产生氧化酶和嗜热蛋白。
2. 检测方法
番茄溃疡病菌的检测方法主要有生物学检测和分子生物学检测两种。
生物学检测方法包括:菌落计数法、生物学特性鉴定法、病原学鉴定法等。其中,菌落计数法是最常用的检测方法之一,其步骤如下:将样品接种于含有适宜营养物质的琼脂平板上,经过一定时间后,计算菌落数量,根据数量判断是否存在番茄溃疡病菌。生物学特性鉴定法则是通过观察番茄溃疡病菌的生物学特性,如菌落形态、生长速度、氧化酶产生等,来鉴定番茄溃疡病菌。病原学鉴定法则是通过接种病原菌于寄主植物上,观察是否出现病症,来鉴定番茄溃疡病菌。
分子生物学检测方法包括:PCR法、LAMP法、ELISA法等。其中,PCR法是最常用的分子生物学检测方法之一,其步骤如下:提取样品中的DNA,利用PCR扩增特定的DNA片段,通过凝胶电泳等方法检测扩增产物,判断是否存在番茄溃疡病菌。
3. 鉴定方法
番茄溃疡病菌的鉴定方法主要有生物学鉴定和分子生物学鉴定两种。
生物学鉴定方法包括:生物学特性鉴定法、生理生化鉴定法、药敏试验等。其中,生物学特性鉴定法和前文中的生物学特性鉴定法相同,生理生化鉴定法则是通过观察番茄溃疡病菌对不同生理生化试剂的反应,来鉴定番茄溃疡病菌。药敏试验则是通过观察番茄溃疡病菌对不同抗生素的敏感性,来鉴定番茄溃疡病菌。
分子生物学鉴定方法包括:PCR法、LAMP法、DNA测序等。其中,PCR法和前文中的PCR法相同,LAMP法则是一种新型的分子生物学检测方法,其原理是利用特定的DNA引物,在等温条件下扩增目标DNA片段,通过观察扩增产物的颜色变化等方法,来鉴定番茄溃疡病菌。DNA测序则是通过对扩增产物进行测序,来鉴定番茄溃疡病菌。
相关标准
GB/T 31665-2015 植物病原菌检疫检测通用方法
GB/T 31666-2015 植物病原菌检疫检测技术规范
GB/T 31667-2015 植物病原菌检疫检测质量控制
GB/T 31668-2015 植物病原菌检疫检测报告编制
GB/T 31669-2015 植物病原菌检疫检测数据管理