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饲料中苯甲酸和山梨酸是常见的防腐剂，但过量使用会对动物健康造成危害。因此，对饲料中苯甲酸和山梨酸的测定十分重要。本标准采用高效液相色谱法进行测定，具有准确、快速、灵敏度高等优点。

1. 原理
将样品中的苯甲酸和山梨酸经过提取、过滤、稀释后，采用高效液相色谱法进行分离和检测。在特定的色谱条件下，苯甲酸和山梨酸分别在不同的保留时间内被分离，通过检测它们的峰面积或峰高来计算其含量。

2. 仪器和设备
（1）高效液相色谱仪
（2）色谱柱：C18色谱柱
（3）移液器、量筒、瓶塞、滤膜等

3. 试剂和材料
（1）甲醇：色谱纯
（2）乙腈：色谱纯
（3）磷酸二氢钾：分析纯
（4）山梨酸、苯甲酸标准品：纯度≥98%
（5）样品：饲料样品

4. 操作步骤
（1）样品制备：取适量样品，加入甲醇进行提取，过滤后稀释至一定浓度。
（2）色谱条件设置：色谱柱为C18色谱柱，流动相为甲醇-乙腈-磷酸二氢钾缓冲液（pH=2.5），流速为1.0 mL/min，检测波长为254 nm。
（3）标准曲线绘制：取不同浓度的苯甲酸和山梨酸标准品，按照相同的方法进行测定，绘制标准曲线。
（4）样品测定：将样品注入高效液相色谱仪中，按照相同的方法进行测定，计算出样品中苯甲酸和山梨酸的含量。

5. 结果计算
（1）计算标准曲线的回归方程和相关系数。
（2）计算样品中苯甲酸和山梨酸的含量。

6. 结果表达
样品中苯甲酸和山梨酸的含量应以mg/kg为单位进行表示。

相关标准：
GB/T 5009.33-2017 食品中苯甲酸和山梨酸的测定 高效液相色谱法
GB/T 22223-2008 饲料中苯甲酸和山梨酸的测定 高效液相色谱法
GB/T 22222-2008 饲料中苯甲酸和山梨酸的测定 气相色谱法
GB/T 22221-2008 饲料中苯甲酸和山梨酸的测定 紫外分光光度法
GB/T 22220-2008 饲料中苯甲酸和山梨酸的测定 滴定法