芒果细菌性黑斑病是由细菌引起的一种病害,严重影响芒果的产量和质量。为了及时、准确地检测芒果细菌性黑斑病原菌,保障芒果的生产和贸易安全,制定了本标准。
一、适用范围
本标准适用于芒果细菌性黑斑病原菌的分子检测。
二、术语和定义
2.1 芒果细菌性黑斑病:由细菌引起的芒果病害。
2.2 PCR:聚合酶链式反应,是一种体外扩增DNA的技术。
2.3 实时荧光定量PCR:利用荧光探针实时监测PCR扩增过程中的荧光信号,定量检测目标DNA的技术。
2.4 内参基因:在PCR反应中作为参照物的基因,用于校正样品中的DNA含量和PCR反应的效率。
三、技术要求
3.1 仪器设备
3.1.1 实时荧光定量PCR仪
3.1.2 电泳仪
3.1.3 紫外分光光度计
3.1.4 冰箱、离心机、移液器等实验室常用设备。
3.2 试剂和材料
3.2.1 DNA提取试剂盒
3.2.2 PCR试剂盒
3.2.3 荧光探针
3.2.4 质控样品
3.2.5 芒果样品
3.3 方法和步骤
3.3.1 样品处理
将芒果样品表面消毒后,取样品内部组织,切成小块,用DNA提取试剂盒提取DNA。
3.3.2 PCR扩增
将提取的DNA加入PCR试剂盒中,进行PCR扩增。选择适当的内参基因,校正样品中的DNA含量和PCR反应的效率。
3.3.3 实时荧光定量PCR检测
将PCR产物加入含荧光探针的反应体系中,进行实时荧光定量PCR检测。根据荧光信号的变化,判断样品中是否存在芒果细菌性黑斑病原菌。
3.4 结果判定
根据实时荧光定量PCR检测结果,判断样品中是否存在芒果细菌性黑斑病原菌。根据质控样品的结果,判断检测结果的准确性和可靠性。
3.5 质量控制
3.5.1 实验室环境应符合相关要求,避免污染和误差。
3.5.2 选择合适的质控样品,进行质量控制。
3.5.3 每批次实验应包括阳性对照、阴性对照和空白对照。
四、报告内容
4.1 样品信息
4.2 检测结果
4.3 结果判定
4.4 质控结果
4.5 检测人员和检测日期等信息。
相关标准
GB/T 28413-2012 芒果质量检验规程
GB/T 28414-2012 芒果病害分类及鉴定方法
GB/T 28415-2012 芒果病害防治技术规程
GB/T 28416-2012 芒果种质资源分类及鉴定方法
GB/T 28417-2012 芒果种子质量检验方法