孕酮是一种重要的激素，它在动物体内具有多种生理功能。在牛乳中，孕酮含量的测定对于研究牛乳的生理功能、质量控制等方面具有重要意义。本标准采用高效液相色谱-质谱法进行测定，具有灵敏度高、准确性好、重现性高等优点。

1. 原理
样品经过前处理后，采用高效液相色谱-质谱法进行测定。孕酮在色谱柱上分离，通过质谱检测器进行检测，得到孕酮的质谱图。根据孕酮的质谱图，计算出孕酮的含量。

2. 仪器和设备
2.1 高效液相色谱仪
2.2 质谱检测器
2.3 气相色谱-质谱联用仪（可选）

3. 试剂和材料
3.1 孕酮标准品
3.2 甲醇
3.3 乙腈
3.4 水
3.5 乙酸
3.6 氨水
3.7 氯仿
3.8 硫酸铵
3.9 氢氧化钠
3.10 氯化钠

4. 样品处理
4.1 取适量样品，加入甲醇和氯仿，振荡混合，离心分离。
4.2 取上清液，加入硫酸铵，调节pH值，离心分离。
4.3 取上清液，加入乙酸和氨水，调节pH值，离心分离。
4.4 取上清液，加入乙腈，振荡混合，离心分离。
4.5 取上清液，过滤，即可进行高效液相色谱-质谱分析。

5. 操作步骤
5.1 仪器预热，调节流速和温度。
5.2 样品进样，进行高效液相色谱分离。
5.3 质谱检测，得到孕酮的质谱图。
5.4 计算孕酮的含量。

6. 结果计算
6.1 孕酮的质谱图中，选择特定的离子峰进行定量。
6.2 根据孕酮标准品的质谱图，建立孕酮的定量曲线。
6.3 根据样品的质谱图，计算出孕酮的含量。

7. 精密度和准确度
7.1 精密度：同一样品进行多次测定，计算相对标准偏差。
7.2 准确度：将已知浓度的孕酮标准品加入样品中，进行测定，计算回收率。

相关标准
GB/T 5009.5-2016 食品中孕酮的测定 气相色谱法
GB/T 5009.198-2016 食品中孕酮的测定 酶联免疫吸附法
GB/T 5009.199-2016 食品中孕酮的测定 放射免疫测定法
GB/T 5009.200-2016 食品中孕酮的测定 液相色谱法
GB/T 5009.201-2016 食品中孕酮的测定 高效液相色谱法