一、范围
本标准适用于牛初乳及其制品中免疫球蛋白IgG的测定分光光度法。

二、引用标准
GB/T 6682 分析化学实验室水质规范及评价方法
GB/T 5009.5 食品中蛋白质的测定
GB/T 5009.60 食品中氨基酸的测定
GB/T 5009.68 食品中脂肪的测定
GB/T 5009.69 食品中灰分的测定

三、原理
样品中的免疫球蛋白IgG与抗IgG抗体结合形成免疫复合物，加入TMB底物后，在过氧化物酶的催化下，TMB底物发生显色反应，产生蓝色产物，其吸光度与样品中IgG的含量成正比关系。

四、仪器设备和试剂
4.1 试剂
4.1.1 磷酸盐缓冲液（PBS），pH 7.4
4.1.2 0.05%Tween-20溶液
4.1.3 抗IgG抗体
4.1.4 TMB底物液
4.1.5 硫酸
4.1.6 乙醇
4.2 仪器设备
4.2.1 分光光度计
4.2.2 恒温水浴器
4.2.3 离心机

五、样品处理
5.1 样品的制备
将样品称取1g，加入10mL的PBS中，用Vortex混匀，离心10min，取上清液，过滤，即为样品。

六、操作步骤
6.1 标准曲线的制备
取0.1mL、0.2mL、0.4mL、0.6mL、0.8mL、1.0mL的IgG标准品，加入PBS中，用PBS稀释至1mL，得到IgG标准品的浓度分别为0.1mg/mL、0.2mg/mL、0.4mg/mL、0.6mg/mL、0.8mg/mL、1.0mg/mL，分别标记为A、B、C、D、E、F。
6.2 样品的测定
取0.1mL的样品，加入0.9mL的PBS中，加入100μL的抗IgG抗体，混匀，放置30min，加入100μL的TMB底物液，混匀，放置15min，加入50μL的硫酸，混匀，放置5min，加入1mL的乙醇，混匀，离心5min，取上清液，测定吸光度。
6.3 确定样品中IgG的含量
根据标准曲线，计算出样品中IgG的含量。

七、结果计算
样品中IgG的含量，按下式计算：
C=As/Aa×Cs
式中：
C——样品中IgG的含量，mg/mL；
As——样品的吸光度；
Aa——标准曲线上对应的吸光度；
Cs——标准品的浓度，mg/mL。

八、质量控制
8.1 空白对照
在操作过程中，应设置空白对照，用PBS代替样品，进行操作，测定吸光度，作为背景值。
8.2 精密度
取同一样品，重复测定3次，计算相对标准偏差（RSD），RSD不应大于5%。
8.3 准确度
加入已知浓度的IgG标准品，进行测定，计算回收率，回收率应在95%~105%之间。

九、报告
报告样品中IgG的含量，保留2位小数，单位为mg/mL。

相关标准
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