一、范围
本标准适用于水溶肥料中游离氨基酸含量的测定。
二、标准引用文件
GB/T 601-2017 化学试剂分装方法
GB/T 6682-2008 分析化学实验室水质规范
GB/T 8170-2008 数字表示法和圆整规则
GB/T 13610-2017 分析化学实验室通用规范
三、定义
3.1 游离氨基酸
指不与其他氨基酸结合的氨基酸。
3.2 水溶肥料
指可溶于水的肥料，包括氮肥、磷肥、钾肥等。
四、原理
样品经水提取后，游离氨基酸与二氧化碳反应生成氨基甲酸，再与重铬酸钾反应生成二氧化碳和水，测定生成的二氧化碳的体积，计算出游离氨基酸的含量。
五、仪器设备
5.1 恒温水浴器
5.2 恒温振荡器
5.3 滴定管
5.4 滴定管架
5.5 洗瓶
5.6 称量器
5.7 烘箱
5.8 水浴加热器
5.9 恒温恒湿箱
5.10pH计
六、试剂和材料
6.1 二氧化碳吸收液：将0.5mol/L NaOH溶液与0.5mol/L BaCl2溶液按1:1的体积比混合制备。
6.2 重铬酸钾：粉末，干燥保存。
6.3 氨水：浓度为25%。
6.4 氯仿：分析纯。
6.5 水：去离子水或蒸馏水。
6.6 标准氨基酸溶液：按GB/T 601-2017制备。
6.7 标准游离氨基酸溶液：按GB/T 601-2017制备。
七、样品的制备
7.1 取样：按GB/T 13610-2017的规定取样。
7.2 样品的制备：将样品称取0.5g，加入50mL氯仿中，振荡30min，离心10min，取上清液过滤，取滤液10mL，用水定容至100mL，摇匀，即为样品溶液。
八、操作步骤
8.1 标准曲线的制备
8.1.1 取0.1mL、0.2mL、0.3mL、0.4mL、0.5mL标准氨基酸溶液，分别加入50mL氯仿中，振荡30min，离心10min，取上清液过滤，取滤液10mL，用水定容至100mL，摇匀，即为标准溶液。
8.1.2 取5个干净干燥的锥形瓶，分别加入0mL、0.5mL、1mL、1.5mL、2mL标准游离氨基酸溶液，用水定容至10mL，摇匀，即为标准溶液。
8.1.3 将标准溶液分别加入5个锥形瓶中，每个锥形瓶中加入2mL二氧化碳吸收液，振荡30min，离心10min，取上清液过滤，取滤液5mL，加入10mL重铬酸钾溶液，加热至沸腾，滴定0.1mol/L NaOH溶液，记录滴定体积V0。
8.1.4 用标准游离氨基酸溶液重复上述操作，记录滴定体积V1。
8.1.5 用水定容至10mL，摇匀，即为标准曲线溶液。
8.2 样品的测定
8.2.1 取5个干净干燥的锥形瓶，分别加入0mL、0.5mL、1mL、1.5mL、2mL样品溶液，用水定容至10mL，摇匀。
8.2.2 将样品溶液分别加入5个锥形瓶中，每个锥形瓶中加入2mL二氧化碳吸收液，振荡30min，离心10min，取上清液过滤，取滤液5mL，加入10mL重铬酸钾溶液，加热至沸腾，滴定0.1mol/L NaOH溶液，记录滴定体积V。
8.2.3 计算游离氨基酸的含量，按式（1）计算：
C=（V-V0）×N×1000/m
式中：
C——游离氨基酸的含量，mg/g；
V——样品溶液的滴定体积，mL；
V0——标准曲线溶液的滴定体积，mL；
N——NaOH溶液的标准浓度，mol/L；
m——样品的质量，g。
九、质量控制
9.1 重铬酸钾溶液的制备：将1.58g重铬酸钾溶解在100mL水中，加入1mL浓氨水，用水定容至100mL，摇匀，即为重铬酸钾溶液。
9.2 标准游离氨基酸溶液的制备：按GB/T 601-2017制备。
9.3 标准曲线的制备：按8.1的方法制备。
9.4 空白试验：按8.2的方法操作，但不加入样品溶液，记录滴定体积Vb。
9.5 精密度：取同一批次的样品，按8.2的方法操作，测定3次，计算相对标准偏差RSD。
9.6 准确度：按8.2的方法操作，加入已知量的标准游离氨基酸溶液，测定3次，计算回收率。
9.7 干扰试验：将游离氨基酸含量为0.1mg/g的标准溶液加入样品溶液中，按8.2的方法操作，测定3次，计算相对误差。
十、结果的表示
游离氨基酸含量应按照实际测定值计算，保留2位小数。结果应按照GB/T 8170-2008的规定进行四舍五入。
十一、分析报告
分析报告应包括以下内容：
11.1 样品的名称、编号、来源等信息；
11.2 游离氨基酸的含量测定结果；
11.3 分析方法的名称、日期、检验人员等信息；
11.4 质量控制的结果；
11.5 分析结果的评价。
相关标准
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GB/T 23347-2009 氮素肥料中游离氨基酸含量的测定