甜菜丛根病是由甜菜丛根病毒引起的一种病害，主要危害甜菜、蔬菜等作物。为了及时发现和控制甜菜丛根病的发生，需要对甜菜丛根病进行检验。本标准介绍了一种酶联免疫法检验甜菜丛根病的方法。

1.范围
本标准适用于甜菜丛根病的检验酶联免疫法。

2.试剂和仪器
2.1 试剂
2.1.1 酶标仙草酸酯酶（HRP）标记的抗甜菜丛根病毒抗体
2.1.2 甜菜丛根病毒抗原
2.1.3 磷酸缓冲盐溶液（PBS）
2.1.4 3,3',5,5'-四甲基联苯二胺（TMB）底物液
2.1.5 硫酸
2.1.6 乙醇
2.1.7 甲醛
2.2 仪器
2.2.1 酶标仪
2.2.2 洗板机
2.2.3 显微镜

3.样品处理
3.1 样品采集
3.1.1 采集甜菜叶片或根部样品，将样品放入离心管中。
3.1.2 加入PBS缓冲液，振荡混匀，离心10分钟，取上清液。
3.2 样品稀释
3.2.1 取上清液1ml，加入PBS缓冲液，制成1:10的稀释液。
3.2.2 取稀释液0.1ml，加入96孔板中，重复3次。

4.酶联免疫法检测
4.1 加样
4.1.1 加入50μl标记抗体，37℃孵育1小时。
4.1.2 弃去孵育液，用PBS洗板3次。
4.1.3 加入50μl甜菜丛根病毒抗原，37℃孵育1小时。
4.1.4 弃去孵育液，用PBS洗板3次。
4.2 染色
4.2.1 加入50μl TMB底物液，37℃孵育15分钟。
4.2.2 加入50μl硫酸，停止反应。
4.2.3 用显微镜观察结果。

5.结果判定
5.1 样品吸光度值（OD）≥2倍空白对照吸光度值，判定为阳性。
5.2 样品吸光度值（OD）<2倍空白对照吸光度值，判定为阴性。

相关标准
GB/T 18411-2015 作物病害检疫技术术语
GB/T 18412-2015 作物病害检疫技术规范
NY/T 1749-2009 甜菜丛根病的检验 直接ELISA法
NY/T 1751-2009 甜菜丛根病的检验 PCR法
NY/T 1752-2009 甜菜丛根病的检验 病毒分离法