一、范围
本标准适用于乳与乳制品中蛋白质的测定。

二、引用标准
GB/T 6682 分析化学实验室水质规范及评价标准
GB/T 5009.5 食品中蛋白质的测定
GB/T 5009.6 食品中氨基酸的测定
GB/T 5009.124 食品中总氮的测定
GB/T 5009.128 食品中氨态氮的测定

三、原理
样品中的蛋白质在碱性条件下与双缩脲反应生成紫色化合物，其吸光度与蛋白质的含量成正比关系。

四、仪器设备
分光光度计：波长范围为500nm至700nm，分辨率为1nm。
离心机：最高转速为3000r/min。
pH计：测量范围为0至14。
电热板：可调温度范围为0℃至100℃。

五、试剂和材料
1. 双缩脲：AR级。
2. NaOH：AR级。
3. Na2CO3：AR级。
4. CuSO4·5H2O：AR级。
5. Na-K塞缩脲：AR级。
6. 蒸馏水：制备用。
7. 标准蛋白质：如牛血清白蛋白（BSA）。
8. 样品：经过均质处理的乳与乳制品样品。

六、操作步骤
1. 标准曲线的制备
(1) 取0.1g BSA，加入50mL蒸馏水中，溶解并定容至100mL，得到1mg/mL的BSA溶液。
(2) 取1mL、2mL、3mL、4mL、5mL BSA溶液，分别加入50mL蒸馏水中，加入1mL NaOH溶液（10g/L），混合均匀，再加入1mL Na2CO3溶液（10g/L），混合均匀，静置15min。
(3) 加入1mL CuSO4·5H2O溶液（10g/L），混合均匀，再加入1mL Na-K塞缩脲溶液（10g/L），混合均匀，静置30min。
(4) 用蒸馏水定容至100mL，得到标准曲线的第一点。
(5) 重复上述步骤，得到标准曲线的其余点。

2. 样品的处理
(1) 取适量样品，加入50mL蒸馏水中，混合均匀，离心10min，取上清液。
(2) 取1mL上清液，加入50mL蒸馏水中，加入1mL NaOH溶液（10g/L），混合均匀，再加入1mL Na2CO3溶液（10g/L），混合均匀，静置15min。
(3) 加入1mL CuSO4·5H2O溶液（10g/L），混合均匀，再加入1mL Na-K塞缩脲溶液（10g/L），混合均匀，静置30min。
(4) 用蒸馏水定容至100mL，得到样品溶液。

3. 测定
(1) 用蒸馏水调节分光光度计为零点。
(2) 分别取标准曲线各点和样品溶液，测定其吸光度值。
(3) 根据标准曲线计算样品中蛋白质的含量。

七、计算
样品中蛋白质的含量（g/100g）=（样品吸光度值-空白吸光度值）/标准曲线上对应吸光度值×标准曲线上对应蛋白质含量×100

八、结果表示
结果精确到0.01g/100g。

九、质量控制
1. 标准曲线的制备应严格按照操作步骤进行，确保标准曲线的准确性。
2. 样品的处理应严格按照操作步骤进行，确保样品的准确性。
3. 每个样品应重复测定3次，取平均值作为最终结果。

十、附录
标准曲线的制备表

相关标准
GB/T 6682 分析化学实验室水质规范及评价标准
GB/T 5009.5 食品中蛋白质的测定
GB/T 5009.6 食品中氨基酸的测定
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GB/T 5009.128 食品中氨态氮的测定