苏丹红是一种有毒的染料，常被添加到食品和饲料中以增加颜色。然而，苏丹红对人体和动物健康有害，因此被禁止使用。为了保障动物健康和人类食品安全，需要对饲料中的苏丹红进行检测。本标准提供了一种高效液相色谱法测定饲料中苏丹红的方法。

1 范围
本标准适用于饲料中苏丹红染料的测定。

2 原理
将饲料样品经过提取、净化后，采用高效液相色谱法进行测定。

3 仪器和设备
3.1 高效液相色谱仪
3.2 色谱柱：C18色谱柱
3.3 称量仪
3.4 超声波清洗器
3.5 离心机
3.6 滤膜：0.22μm

4 试剂和材料
4.1 甲醇：色谱纯
4.2 乙腈：色谱纯
4.3 磷酸二氢钾：分析纯
4.4 磷酸氢二钠：分析纯
4.5 离子交换树脂：D101型
4.6 水：去离子水或超纯水
4.7 饲料样品

5 操作步骤
5.1 取样
按照GB/T 6682的规定，取饲料样品。

5.2 样品制备
将样品粉碎并混匀，取1g样品加入50mL离子交换水中，超声波清洗10min，离心10min，取上清液过滤，取1mL上清液加入10mL甲醇中，超声波清洗10min，离心10min，取上清液过滤，即为样品制备液。

5.3 色谱条件
色谱柱：C18色谱柱（250mm×4.6mm，5μm）
流动相：甲醇-0.05mol/L磷酸二氢钾缓冲液（30:70）
流速：1.0mL/min
检测波长：507nm
进样量：20μL

5.4 标准曲线的制备
取苏丹红标准品，加入甲醇中制备1mg/mL的标准溶液，再用甲醇稀释得到不同浓度的标准溶液，分别进行测定，得到峰面积与浓度的标准曲线。

5.5 样品测定
取样品制备液，进行高效液相色谱测定，根据标准曲线计算出样品中苏丹红的含量。

6 结果计算
样品中苏丹红的含量，按照下式计算：
C=（As/A标准）×C标准
其中，C为样品中苏丹红的含量（mg/kg），As为样品中苏丹红的峰面积，A标准为标准曲线中苏丹红的峰面积，C标准为标准品中苏丹红的浓度（mg/mL）。

7 精密度和准确度
本方法的相对标准偏差（RSD）不大于10%。

8 检出限和定量限
本方法的检出限为0.05mg/kg，定量限为0.1mg/kg。

相关标准
GB/T 6682-2008 饲料中铅、镉、砷、汞、铬、铜、锌、锰、钴、镍、钒、钛、硒、铁、钙、钾、钠、镁、氯离子的测定 原子吸收光谱法
GB/T 6432-2018 饲料中脂肪酸甲酯的测定 气相色谱法
GB/T 6433-2018 饲料中粗蛋白的测定 熏蒸法
GB/T 6434-2018 饲料中粗纤维的测定 酸洗法
GB/T 6435-2018 饲料中粗灰分的测定 灼烧法